Question

【题目】土壤盐碱化是影响农作物生长的重要环境因素。某研究小组从盐碱地某种农作物的根际土壤采样，筛选鉴定出具有固氮及分泌IAA能力的多功能菌株，并对其盐碱耐受性进行了测定。回答下列问题：

（1）该小组分离纯化固氮菌所用的培养基配方（pH7．0~7．5）如表所示：

KH2PO4	MgSO4·7H2O	NaCl	CaCO3	甘露醇	CaCO4·2H2O	蒸馏水
0．2g	0．2g	0．2g	5．0g	10g	0．1g	1000mL

该培养基无氮源的原因是_________________。该培养基需要添加琼脂的原因是_________________。

（2）研究人员将菌株接种于添加有色氨酸的牛肉膏蛋白胨（LB）培养基中培养数天，测定菌株分泌的IAA量。推测培养基中添加色氨酸的目的是___________________。

（3）为测定菌株的耐盐碱水平，需在______________不同的LB液体培养基中培养菌株，每组重复3次。

（4）对土壤样品______________后涂布平板，可统计样品中的活菌数目。为了保证结果准确，一般选择菌落数在______________的平板进行计数。

Answer 1

【答案】固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源，能在该培养基上生长，而无固氮能力的微生物不能在该培养基上生长，从而起到筛选/分离纯化固氮菌的作用 液体培养基不能分离单菌落 为IAA合成提供原料 盐碱度（盐/NaCl浓度和pH/酸碱度） 稀释 30~300

【解析】

1．微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
2．微生物数目的间接计数法（活菌计数法）①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。

（1）固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源，应该选择无氮培养基分离纯化固氮菌。从所用配方来看，培养基是液态的，而液体培养基不能分离单菌落，所以需要添加琼脂（凝固剂）。

（2）细胞可以利用色氨酸经过一系列的反应合成生长素IAA。

（3）测定菌株耐盐碱水平，测试的是盐和碱两个因素，因此需在NaCl浓度和pH（酸碱度）不同的LB液体培养基中培养菌株。

（4）土样应该稀释后再涂布平板，以免菌液浓度过高影响分离计数。为了保证计数结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。