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    16．某兴趣小组采用稀释涂布平板法对牛奶样品中的微生物进行计数，步骤如下．回答下列问题：
    （1）梯度稀释：每次取样前需用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，目的是使微生物和无菌水混合均匀．
    （2）涂布平板：取0．lmL稀释液，选用图中的B均匀地涂布在牛肉膏蛋白腺固体培养基表面，每个浓度下涂布三个平板．为避免杂菌污染，接种应在（酒精灯）火焰附近进行．可用未接种的培养基作为空白对照以检验培养基配制是否达标．

    （3）培养与计数：将上述平板放入恒温培养箱中培养，每隔12小时统计一次菌落数，取菌落数稳定时的记录作为结果，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目．在104、105、106倍稀释时的统计结果记录如表：

    稀释倍数
    菌落数平均值（个）
    时间    		12h24h36h48h
    10426310421421
    1038365050
    1060466
    计算得每毫升牛奶样品中细菌数大约是5×l07个．这种方法统计的活菌数往往比实际数目低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落．除此以外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法，此方法需要使用血细胞计数板．

    分析 稀释涂布法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养．在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落．

    解答 解：（1）梯度稀释过程中，为了使微生物和无菌水混合均匀，每次取样前需用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次．
    （2）图中A为接种环、B为涂布棒、C为吸管、D为接种针，涂布平板时，需要使用涂布棒将菌液均匀地涂布在牛肉膏蛋白腺固体培养基表面，每个浓度下涂布三个平板．为避免杂菌污染，接种应在（酒精灯）火焰附近进行．可用未接种的培养基作为空白对照以检验培养基配制是否达标．
    （3）将上述平板放入恒温培养箱中培养，每隔12小时统计一次菌落数，取菌落数稳定时的记录作为结果，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目．菌落计数是应选择30～300菌落数进行计算，表格数据均为平均值，因此利用表格中稀释倍数为105的进行计算，每毫升牛奶样品中细菌数大约=50×105÷0.1=5×l07个．当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此这种方法统计的活菌数往往比实际数目低．除此以外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法，此方法需要使用血细胞计数板．
    故答案为：
    （1）使微生物和无菌水混合均匀
    （2）B     （酒精灯）火焰    未接种
    （3）因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目    5×l07
    当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落      显微镜直接计数

    点评 本题考查微生物分离和培养，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验采用的方法、实验步骤等，需要考生在平时的学习过程中注意积累．

    练习册系列答案
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    B．光照强度为b时，该细胞只能进行无氧呼吸
    C．光照强度为c时，所对应的柱状图是错误的
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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

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    维生素NH4NO3MgCl2多聚联苯水琼脂
    培养基甲++++++
    培养基乙+++++-
    注：+表示添加该物质，-表示没有添加该物质
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    （3）联苯降解菌在实验室里的降争率很高，但是实际污染环境的治理中降解率很低，这可能是因为实际污染环境中多聚联苯不是唯一碳源或其他污染物（或其他条件）导致联苯水解酶的数量或活性降低．（答出一种可能即可）

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