Question

逆转录病毒载体是一种表达型质粒，结构如图所示．如图的“逆转录病毒序列”可以整合到动物细胞的染色体上，不断地表达其携带的目的基因，获得大量重组逆转录病毒．（E、F、H分别为限制酶 E、F、H的酶切位点）．
（1）逆转录的模板是

 

，原料是

 

．
（2）在构建重组质粒时，目的基因插入该质粒，此过程需要的酶是限制酶

 

和

 

（3）将重组质粒转人大肠杆菌前用某种离子处理大肠杆菌使之成为

 

才能完成转化过程．为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加

 

的培养基进行培养．
（4）获取大量重组质粒后，可培育转基因小鼠，将重组质粒导入小鼠受精卵的方法是

 

．若目的基因进人细胞后插入在一条染色体DNA上，那么获得转基因纯合子小鼠的方法是

 

．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：分析题图：图示为一种表达型质粒的结构示意图，该质粒含有E、F、H三种限制酶的酶切位点；含有抗生素A抗性基因，可作为标记基因；含有“逆转录病毒序列”，该序列可以整合到动物细胞的染色体上，不断地表达其携带的目的基因，获得大量重组逆转录病毒．

解答： 解：（1）逆转录是以RNA为模板合成DNA的过程，需要以四种脱氧核苷酸为原料．
（2）根据题干信息“逆转录病毒序列可以整合到动物细胞的染色体上，不断地表达其携带的目的基因”可知，在构建重组质粒时，应将目的基因插入该质粒的逆转录病毒序列中，因此该过程应选用限制酶F切割质粒和含有目的基因的外源DNA分子，此外还需要DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA分子．
（3）将目的基因导入微生物细胞时，需用Ca²⁺（或CaCl₂）处理微生物细胞使之成为感受态细胞（易吸收周围环境中的DNA分子）才能完成转化过程．标记基因是抗生素A抗性基因，因此可用含有抗生素A的培养基筛选含有重组质粒的大肠杆菌．
（4）显微注射法将目的基因导入动物细胞最有效的方法．若目的基因进人细胞后插入在一条染色体DNA上，则转基因动物可被看成杂合子，要想获得转基因纯合子小鼠，可让转基因小鼠间相互交配（或杂交）．
故答案为：
（1）RNA   （四种）脱氧核苷酸
（2）F    DNA连接酶
（3）感受态细胞   抗生素A   
（4）显微注射法   转基因小鼠间相互交配（或杂交）

点评：本题结合质粒结构示意图，考查基因工程、基因分离定律的实质及应用，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，能根据题干信息和图示信息选择合适的限制酶；掌握基因分离定律的实质，明确转基因生物可被视为杂合子，再根据题干要求答题．