Question

12．绿色荧光蛋白GFP能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能．如图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

（1）若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G^↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-^↓GATC-，在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点，在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来可以连接，理由是：因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的．
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是显微注射技术．
（3）获得转基因猪的关键步骤是②（填序号），GFP基因的作用是作为标记基因．抑制小猪抗原表达的基因要插入到启动子和终止子之间．获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是可以避免器官移植时发生免疫排斥反应．
（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：②①③④（用数字表示）．
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸   ②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）              ④表达出蓝色荧光蛋白．

Answer 1

分析 根据题意和图示分析可知：图示表示绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程，其中①表示目的基因的获取；②为基因表达载体的构建过程；③是将目的基因导入受体细胞的过程．之后还采用了核移植技术、早期胚胎培养技术和胚胎移植技术．

解答 解：（1）限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G^↓GATCC-，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-^↓GATC-，可见这两种限制酶切割后形成的黏性末端相同，因此能在DNA连接酶的作用下连接起来．
（2）将重组质粒导入动物细胞的方法是显微注射法．
（3）获得转基因猪的关键步骤是②，构建基因表达载体．GFP基因的作用是作为标记基因．抑制小猪抗原表达的基因要插入到启动子和终止子之间．获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是可以避免器官移植时发生免疫排斥反应．
（4）蛋白质工程的基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白质工程特有的途径；以下按照基因工程的一般步骤进行．因此，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列；①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸；③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）；④表达出蓝色荧光蛋白．
故答案为：
（1）可以连接 因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的
（2）显微注射技术
（3）②标记基因 终止子 器官移植时发生免疫排斥反应
（4）②①③④

点评 本题结合绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程图，考查基因工程、蛋白质工程、动物细胞工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，能准确判断图中各过程的名称；识记蛋白质工程的基本途径；识记动物细胞核移植技术和胚胎工程技术的相关应用，能结合题图答题．