Question

逆转录病毒载体是一种表达型质粒，结构如图所示。图上的“逆转录病毒序列 ”可以整合到动物细胞的染色体上，不断地表达其携带的目的基因，获得大量重组逆转录病毒。（E、F、H分别为限制酶 E、F、H的酶切位点）。

（1）逆转录的模板是_____,原料是_____。
（2）在构建重组质粒时，目的基因插入该质粒，此过程需要的酶是限制酶____和____0
（3）将重组质粒转人大肠杆菌前用某种离子处理大肠杆菌使之成为_______才能完成转化过程。为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加_____的培养基进行培养。
（4）获取大量重组质粒后,可培育转基因小鼠，将重组质粒导入小鼠受精卵的方法是_______。若目的基因进人细胞后插入在一条染色体DNA上，那么获得转基因纯合子小鼠的方法是______________。

Answer 1

（1）RNA（1分）     （四种）脱氧核苷酸   （2）F    DNA连接酶
感受态细胞 抗生素A  （4）显微注射法   转基因小鼠间相互交配（或杂交）

解析试题分析：据图分析，基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心，基因工程载体的条件是能在受体细胞中保存并大量复制、有一至多了限制性内切酶切点和有特殊的遗传标记基因，便于进行筛选。逆转录酶序列中有限制酶F的切割位点，目的基因与运载体结合，在粘性末端碱基互补配对，需要DNA连接酶作用于磷酸二酯键，形成重组DNA分子；该质粒上有具有的遗传标记基因是抗生素A抗性基因，可以用加有抗生素A的选择培养基进行筛选；目的基因进人细胞后插入在一条染色体DNA上，动物细胞可以让转基因雌雄小鼠间相互交配，逐代筛选。（1）逆转录是以RNA为模板合成DNA的过程，所需要的模板为RNA，原料为四种脱氧核苷酸。（2）基因工程需要工具酶是限制酶和DNA连接酶；用到的限制酶不能破坏标记基因（抗生素A抗性基因），且应该整合到“逆转录病毒序列”上（3）抗生素A抗性基因为标记基因，用来帮助筛选目的基因。（4）用显微注射技术将重组质粒溶液导人受精卵；如A为重组逆转录病毒，还可采取感染方法。目的基因进人细胞后插入在一条染色体DNA上，对应的同源染色体上无对应的等位基因；让转基因小鼠相互交配，就能获得转基因纯合子小鼠。
考点：本题考查RNA复制，逆转录需要的模板、原料，重组质粒时目的基因的插入位点，DNA分子杂交技术的知识，意在考查学生识图能力、信息的提取与应用能力、通过比较与综合做出合理判断的能力等。