Question

18．某同学为探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了如下实验．并通过该实验成功筛选出了能高效降解尿素的细菌（目的菌）．培养基成分如表所示，实验步骤如图所示．请回答：

KH2PO4	1.4g
Na2HPO4	2.1g
MgSO4•7H2O	0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
琼脂糖	15g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到100mL

（1）制备培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、调pH、分装、加塞、包扎、灭菌等．
（2）“目的菌”生长所需的氮源为培养基中的尿素．用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基的原因为防止琼脂中氮元素对实验的干扰．为检测能降解尿素细菌的存在与否应在培养基中加入酚红指示剂，若存在，则菌落周围将形成红色环带．
（3）图中为将细菌转接到固体培养基上，应采用涂布分离法进行接种，获得单菌落后继续筛选．
（4）对尿素溶液进行灭菌的最适方法是D．
A．高压蒸汽灭菌   B．紫外灯照射    C.70%的酒精浸泡     D．过滤．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素．
3、无菌技术：消毒和灭菌

	消毒	灭菌
概念	使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法	灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用对象	操作空间、某些液体、双手等	接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

解答 解：（1）制备培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、调pH、分装、加塞、包扎、灭菌等．
（2）目的菌生长繁殖需要的氮源来自尿素；用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基可防止琼脂中氮元素对实验的干扰；分解尿素的细菌能合成脲酶，将尿素分解形成碱性物质氨，在碱性环境下，酚红指示剂变红．
（3）图示采用的接种方法是稀释涂布平板法．
（4）A、由于尿素加热会分解，A错误；
B、紫外灯照射只能起到消毒作用，B错误；
C、70%的酒精浸泡只能起到消毒作用，C错误；
D、由于尿素加热会分解，对尿素溶液进行灭菌最好用G6玻璃沙漏斗过滤，D正确．
故选：D．
故答案为：
（1）调 pH
（2）尿素     防止琼脂中氮元素对实验的干扰      红
（3）涂布分离
（4）D

点评 本题结合数据表格和图解，考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养基的制备步骤；识记接种微生物常用的两种方法；识记无菌技术，能结合所学的知识准确答题．