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    下图（一）为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素（抗生素）抗性基因，tctR为四环素（抗生素）抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。下图（二）为几种酶作用于基因的位置。请回答下列问题：

    （1）在基因工程中常用的工具有三种：一是用作切取目的基因的________酶；二是将目的基因与运载体拼接的________酶；三是作为运载体的质粒。

    （2）将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的动载体（质粒）进行拼接形成重组DNA，理论上讲，重组DNA可能有________种，其中有效的（所需要的）重组DNA是________，因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。

    （3）利用图（一）所示的质粒拼接形成的拼接产物（重组DNA）与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物（重组DNA）是________。

    （4）有效的重组DNA成功导入受体细胞进行表达时，首先需要进行转录，RNA聚合酶识别和结合的位点是图（一）中的________。

    （5）在基因工程中，作用于图（二）所示b位置的酶是________。

    （6）绿色荧光蛋白转基因克隆猪的形成是通过基因工程实现的，它是将水母绿色荧光蛋白基因转移到猪的特定细胞中，操作过程中一般利用未受精的卵细胞去核后做为受体，而不用普通的体细胞，原因是：________________。

    答案：
    解析：

    　　（1）限制（限制性内切）　DNA连接

    　　（2）三　目的基因－运载体

    　　（3）运载体－运载体、目的基因－运载体

    　　（4）P（启动子）

    　　（5）DNA解旋酶

    　　（6）卵细胞大易操作、分化程度低，体细胞的细胞核在卵细胞质中能表现出全能性


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    科目：高中生物 来源：2010年浙江省杭州学军中学高三上学期第一次月考生物试题 题型：综合题

    （8分）为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片断大小。下表是某小组进行的相关实验。

     
    已知
    一线性DNA序列共有5000bp（bp为碱基对）
    		第一步水解
    		产物（单位bp）
    		第二步水解
    		产物（单位bp）
     
    A切割酶
    		2100
    		将第一步水解分离后，分别用B酶切割
    		1900 200
    1400
    		800  600
    1000
    		1000
    500
    		500
     
    B酶切割
    		2500
    		将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割
    		1900 600
    1300
    		800  500
    1200
    		1000 200
    经A酶和B酶同时切割
    		1900    1000    800     600    500    200
    （1）由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为         个和
           个。
    （2）根据表中数据，请在下图中标出相应限制性酶的酶切位点并注明相关片断的大小。

    （3）已知BarnH I与BglⅡ的识别序列及切割位点如右图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BarnH工和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后           和            序列明显增多。

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片断大小。下表是某小组进行的相关实验。

    已知

    一线性DNA序列共有5000bp（bp为碱基对）

    第一步水解

    产物（单位bp）

    第二步水解

    产物（单位bp）

    A切割酶

    2100

    将第一步水解分离后，分别用B酶切割

    1900 200

    1400

    800  600

    1000

    1000

    500

    500

    B酶切割

    2500

    将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割

    1900 600

    1300

    800  500

    1200

    1000 200

    经A酶和B酶同时切割

    1900    1000    800     600    500    200

    （1）由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为    个和    个。

    （2）根据表中数据，请在下图中标出相应限制性酶的酶切位点并注明相关片断的大小。

    （3）已知BarnH I与BglⅡ的识别序列及切割位点如下图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BarnH工和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后            和             序列明显增多。

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