Question

某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：

（1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量__________。

（2）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是___________。细胞培养应在含5%CO₂的恒温培养箱中进行，CO₂的作用是____________________________。

（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长____________。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用___________消化处理。

（4）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的_______________。

（5）已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入_______________，B组细胞培养液中加入等量无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的_______________或_______________合成水平的差异，确定Y的药效。

Answer 1

（1）多

（2）制造出与血液类似的环境。提供营养     调节pH值

（3）趋于停止 （接触抑制）    多       胶原蛋白酶 （胰蛋白酶）

（4）抗生素

（5）Y   mRNA  蛋白质

(1) 甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。肿瘤细胞为无限增殖的细胞，细胞周期短。在相同条件下，培养相同的时间，甲细胞的数量多于乙细胞。 (2) 动物细胞培养液中必须加入动物血清，血清中含有血清蛋白、生长因子、促进细胞贴壁的因子、激素等合成培养基中缺乏的物质。大多数细胞培养液所需 pH 为 7.2 ～ 7.4 ，而多数培养液靠碳酸氢钠 (NaHCO3) 与 CO2 体系进行缓冲，所以 CO2 的作用是调节培养液 pH 。  (3) 甲为肿瘤细胞能无限增殖，传代的次数要比乙细胞多，乙细胞 ( 正常肝细胞 ) 在培养瓶中贴壁生长，当铺满瓶壁时，生长停止。为得到更多的肝细胞，需要定期地用胰蛋白酶使细胞脱离瓶壁，进行传代培养。 (4) 培养液中加入抗生素来抑制和杀灭微生物，抗生素对动物细胞没有影响。 (5) 设计一组加入抗癌药物的实验组，一组不加药物的对照组，通过检测药物影响 X 基因的表达过程，即转录形成 mRNA 、翻译形成蛋白质的量来检验药效。