研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答
1.在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体，原因是 ；如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成，脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为 。
2.图甲中在构建重组载体时，酶切目的基因和酶切质粒时，所用的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端必须是 。
3.图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是 ， 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是 ，这 两种酶作用的化学键都是 。
4.EcoR I限制酶只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。
5.原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂，空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分（组织细胞分散开），重新接种到另外的培养器皿内再进行培养，这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时，需要用 酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
6.研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是 。
7.下图所示pBR322是目前常用的人工质粒载体。如果将BamHI处理后的pBR322质粒与用BgIⅡ处理得到的目的基因进行重组，并将重组质粒导入原本无ampR和tetR 的大肠杆菌进行培养。为了检测重组质粒是否成功导入大肠杆菌，现将上述大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是___ _____ ，图三结果显示，多数大肠杆菌内导入的是___ __。
1.质粒进入受体细胞（宿主细胞）能稳妥保存并复制自己（有多个酶切位点，有标记基因） 1000a—18000
2.互补
3.DNA连接酶 RNA聚合酶 磷酸二酯键
4.
5.（胰）蛋白酶
6.let-7转录的无翻译功能的miRNA能与RAS mRNA特异性结合，抑制RAS蛋白质的合成
7.抗氨苄青霉素但不抗四环素 Pbr322Z质粒 （每格1分，共11分）
【解析】
试题分析：细菌质粒作为载体的原因是：１、能保存并复制自己２、有多个酶切位点３、有标记基因、４对宿主细胞无毒害作用；质粒的质量＝脱氧核苷酸的分子质量数－脱水分子质量数＝１０００ａ－１８*１０００；在构建重组的载体时，产生黏性末端必须得互补，才能连起来；把两个基因缝合起来用ＤＮＡ连接酶，转录时用ＲＮＡ聚合酶，这两种酶作用的部分是磷酸二酯键；传代培养过程中，使细胞间分散开来需要用到胰蛋白酶；let-7转录的无翻译功能的miRNA能与RAS mRNA特异性结合，抑制RAS蛋白质的合成；菌落表现型是抗氨苄青霉素但不抗四环素，多数大肠杆菌内导入的是Pbr322Z质粒。
考点：本题考查基因工程、细胞工程的相关知识，意在考查考生能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论的能力。
科目：高中生物 来源：2012年普通高等学校招生全国统一考试理综生物部分（福建卷带解析） 题型：综合题
肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。
请回答：
（１）进行过程①时，需用 酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为 。
（２）进行过程②时，需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
（３）研究发现，let-7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞提取 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。
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科目：高中生物 来源：2013-2014学年浙江杭州二中高三上期第二次月考生物卷（解析版） 题型：综合题
（10分）2013年初，我国部分地区陷入严重的雾霾和污染天气中，北京的空气污染指数PM2.5曾接近1000。据统计，北京近十年来肺癌患者增加了60%，引起肺癌的因素有多种，如大气污染、吸烟、免疫力降低等。
分析以下材料，回答相关问题：
材料I：某学生研究小组用生理盐水制备香烟浸出液，进行“香烟生理盐水浸出液对大鼠体重影响” 的研究。
（1）将生理状态相似的大鼠随机分为三组，每天同一时间分别对小剂量组和中剂量组按每百克体重1.0ml灌胃不同浓度的香烟生理盐水浸出液，同时对照组按 灌胃 _。结果如上图所示。由图可以得出的结论是 。
（2）若进一步研究香烟生理盐水浸出液对大鼠身体健康的影响，还需对肝脏病理、肺部纤维增生程度进行检查，可通过细胞培养观察细胞，如果 可判断为癌变。
材料II：研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。
该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答。
（3）形成重组载体时，需用 酶切割 、 。
（4）进行过程②时，需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
（5）研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是let-7基因通过转录形成miRNA，与RASmRNA通过 结合，从而使 无法以RASmRNA为模板完成RAS蛋白的合成。抑制肺癌细胞的增殖。
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科目：高中生物 来源：2014届浙江省东阳市高三9月月考生物试卷（解析版） 题型：综合题
(10分)肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术的基本流程如下图甲所示。
请回答：
(1)进行过程①时，需用 酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为 。
(2)进行过程②时，需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
(3)研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图乙所示。据图分析，可从细胞中提取 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是细胞中 (选填 “RAS mRNA”或“RAS蛋白”)含量减少引起的。
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科目：高中生物 来源：2012-2013学年北京房山高三4月第一次模拟考试生物卷（解析版） 题型：综合题
2013年初，我国部分地区陷入严重的雾霾和污染天气中，北京的空气污染指数PM2.5曾接近1000。据统计，北京近十年来肺癌患者增加了60%，引起肺癌的因素有多种，如大气污染、吸烟、免疫力降低等。
分析以下材料，回答相关问题：
材料I：某学生研究小组用生理盐水制备香烟浸出液，进行“香烟生理盐水浸出液对大鼠体重影响” 的研究。
（1）将生理状态相似的大鼠随机分为三组，每天同一时间分别对小剂量组和中剂量组按每百克体重0.5ml、1.0ml灌胃香烟生理盐水浸出液，同时对照组按每百克体重1.0ml灌胃___________________。结果如下图所示。由图可以得出的结论是_______________。
（2）若进一步研究香烟生理盐水浸出液对大鼠身体健康的影响，还需对肝脏病理、肺部纤维增生程度进行检查，并通过显微镜观察______________来初步判断是否发生癌变等。若肺部细胞已发生癌变，其根本原因是_______。
材料II：研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。
该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答。
（3）形成重组载体时，需用 酶切割 。
（4）进行过程②时，需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
（5）研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是let-7基因通过转录形成miRNA， ，从而抑制肺癌细胞的增殖。
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科目：高中生物 来源：2012年普通高等学校招生全国统一考试理综生物部分（福建卷解析版） 题型：综合题
现代生物科技专题
肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。
请回答：
（１）进行过程①时，需用 酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为 。
（２）进行过程②时，需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
（３）研究发现，let-7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞提取 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。
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