Question

5．中国科学家成功将人肝再生增强因子（ hALR）的基因导入羊的乳腺上皮细胞中，再利用核移植技术培育出了转基因克隆羊，其乳汁含有hALR．请回答下列问题：
（1）从人的肝细胞中获取所有mRNA，并以此为模板反转录产生多种cDNA/互补DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，该受体菌群体叫做人的cDNA（部分DNA）文库，从该文库中获得hALR基因，这样获得的基因与人的肝细胞中的hALR基因相比有（有/没有）区别．
（2）得到hALR基因后，若要较快地得到大量的hALR基因，一般采用PCR技术扩增．扩增过程包括：目的基因解链为单链、引物与单链相应互补序列结合、在Taq/热稳定DNA聚合/DNA聚合酶作用下延伸，如此重复循环．如图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向．

（3）目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是转基因生物的DNA上是否插入了目的基因．
（4）人的hALR基因能够在羊乳腺细胞表达出相同的hALR，说明所有生物共用一套密码子．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、cDNA文库和基因文库的比较表：

文库类型	cDNA	基因组文库
文库大小	小	大
基因中启动子	无	有
基因中内含子	无	有
基因多少	某种生物的部分基因	某种生物的全部基因
物种间的基因交流	可以	部分基因可以

解答 解：（1）以mRNA为模板，通过逆转录方法产生多种cDNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，该受体菌群体叫做cDNA（部分DNA）文库；从部分基因文库中获取的DNA没有启动子、内含子和终止子等，因此这样获得的基因与人的肝细胞中的hALR基因相比有区别．
（2）PCR技术扩增过程包括：目的基因解链为单链、引物与单链相应互补序列结合、在热稳定DNA聚合酶作用下延伸，如此重复循环．由于DNA分子的两条链是反向平行的，且延伸总是从3'-5'，若图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，则另一条引物的位置及扩增方向．如图．
（3）目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是转基因生物的DNA上是否插入了目的基因．
（4）由于生物共用一套遗传密码子，因此人的hALR基因能够在羊乳腺细胞表达出相同的hALR．
故答案为：
（1）cDNA/互补DNA     cDNA（部分DNA）    有
（2）引物与单链相应互补序列结合    Taq/热稳定DNA聚合/DNA聚合      

（3）插入了目的基因
（4）共用一套密码子

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、概念、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确判断各选项．