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【题目】下表是几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题:

限制酶

BamHⅠ

Bcl

Sau3AⅠ

HindⅢ

识别序

列及切

割位点

(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒,应选用________两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒,需将其转入处于________态的大肠杆菌。

(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加________,平板上长出的菌落,常用PCR鉴定,所用的引物组成为图2中______________

(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接,连接部位的6个碱基对序列为_______,对于该部位,这两种酶________(填“都能”“都不能”或“只有一种能”)切开。

(4)若用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得________种大小不同的DNA片段。

【答案】1BclIHindⅢ 连接 感受

2)四环素 引物甲和引物丙

3都不能

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【解析】1)选择的限制酶在目的基因的两侧都应该有切割位点,又因为用BamHⅠ酶会将两个标记基因都破坏,所以构建基因表达载体时只能选择BclIHindⅢ对质粒和目的基因进行切割,漏出两种不同的粘性末端,再利用DNA连接酶将两者定向连接。再将重组质粒导入感受态的大肠杆菌进行扩增。

2)由于构建重组质粒的时候,氨苄青霉素抗性基因被破坏,而四环素的抗性基因没有被破坏,所以为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加四环素。根据图2可知对目的基因进行扩增时的引物应该是引物甲和引物丙。

3)根据表格中碱基分析,若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接,连接部位的6个碱基对序列为,对于该部位,这两种酶都不能切开。

4)根据表格分析可知Sau3A I可以切割BclIBamHⅠ的切割位点,所以若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段。

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(6)微型繁殖培育无病毒幼苗时,一般选取______作为外植体,依据是_______________

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