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    将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的环状产物有几种？（  ）

    A．1       B． 2     C．3      D． 4

    C


    解析:

    存在目的基因-载体连接物、目的基因--目的基因连接物、载体-载体连接物等3种环状的重组DNA。 

    【点评】此题考查基因工程中内切酶和连接酶的作用。有关内切酶作用的高考题成为2008年的亮点。

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    科目：高中生物 来源： 题型：阅读理解

    下图（一）为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素（抗生素）抗性基因，tctR为四环素（抗生素）抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。下图（二）为几种酶作用于基因的位置。请回答下列问题：

    （1）在基因工程中常用的工具有三种：一是用作切取目的基因的      酶；二是将目的基因与运载体拼接的       酶；三是作为运载体的质粒。

    （2）将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的动载体（质粒）进行拼接形成重组DNA，理论上讲，重组DNA可能有“          ”、“         ”、“         ”三种，其中有效的（所需要的）基因表达载体是         ，因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。

    （3）利用图（一）所示的质粒拼接形成的3种拼接产物（基因表达载体）与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物（基因表达载体）是          。

    （4）有效的基因表达载体成功导入受体细胞进行表达时，首先需要进行转录，RNA聚合酶识别和结合的位点是图（一）中的       。在动物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是              。在植物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是              。是因为这种微生物很容易侵染到                

    中，从而把它的Ti质粒上的              转移到受体细胞染色体的DNA上。

    （5）在基因工程中，作用于图（二）所示a位置的酶是        ；作用于b位置的酶是

                      。

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    科目：高中生物 来源：2010-2011学年吉林省实验中学高二上学期期末质量检测生物试卷 题型：综合题

    下图（一）为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素（抗生素）抗性基因，tctR为四环素（抗生素）抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。下图（二）为几种酶作用于基因的位置。请回答下列问题：

    （1）在基因工程中常用的工具有三种：一是用作切取目的基因的     酶；二是将目的基因与运载体拼接的      酶；三是作为运载体的质粒。
    （2）将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的动载体（质粒）进行拼接形成重组DNA，理论上讲，重组DNA可能有“         ”、“        ”、“        ”三种，其中有效的（所需要的）基因表达载体是        ，因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。
    （3）利用图（一）所示的质粒拼接形成的3种拼接产物（基因表达载体）与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物（基因表达载体）是         。
    （4）有效的基因表达载体成功导入受体细胞进行表达时，首先需要进行转录，RNA聚合酶识别和结合的位点是图（一）中的      。在动物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是             。在植物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是             。是因为这种微生物很容易侵染到                
    中，从而把它的Ti质粒上的             转移到受体细胞染色体的DNA上。
    （5）在基因工程中，作用于图（二）所示a位置的酶是       ；作用于b位置的酶是
                    。

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    科目：高中生物 来源：2010～2011学年湖南省安化县第十二中学高三第二次月考生物试题 题型：综合题

    右下图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。据图回答下列问题：

    ⑴将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有______种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行分离纯化。
    ⑵用上述几种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是____________________；
    ⑶在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是                               。
    ⑷基因工程是一柄“双刃剑”，一方面可以极大地提高栽培作物的基因潜力，打破了种间的______隔离，从变异的角度看，基因工程的原理是_____________；另一方面也可能给生态系统和人类带来安全隐患，举一例简要说明：_______________________。

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    科目：高中生物 来源：2008年海南高考生物卷 题型：综合题

    下图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、?BamHI在内的多种酶的酶切位点。?

    据图回答：?
    （1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI?酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有               、             、          三种。若 要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行            。?
    （2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是         ；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是         。?
    （3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是         ，其合成的产物是         。?
    （4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是       。?

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    科目：高中生物 来源：2012届吉林省高二上学期期末质量检测生物试卷 题型：综合题

    下图（一）为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素（抗生素）抗性基因，tctR为四环素（抗生素）抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。下图（二）为几种酶作用于基因的位置。请回答下列问题：

    （1）在基因工程中常用的工具有三种：一是用作切取目的基因的      酶；二是将目的基因与运载体拼接的       酶；三是作为运载体的质粒。

    （2）将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的动载体（质粒）进行拼接形成重组DNA，理论上讲，重组DNA可能有“          ”、“         ”、“         ”三种，其中有效的（所需要的）基因表达载体是         ，因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。

    （3）利用图（一）所示的质粒拼接形成的3种拼接产物（基因表达载体）与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物（基因表达载体）是          。

    （4）有效的基因表达载体成功导入受体细胞进行表达时，首先需要进行转录，RNA聚合酶识别和结合的位点是图（一）中的       。在动物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是              。在植物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是              。是因为这种微生物很容易侵染到                

    中，从而把它的Ti质粒上的              转移到受体细胞染色体的DNA上。

    （5）在基因工程中，作用于图（二）所示a位置的酶是        ；作用于b位置的酶是

                      。

     

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