Question

18．如图表示分离、纯化及保存枯草芽孢杆菌菌株的简要过程，回答下列问题：

（1）将土壤表层泥土稀释液煮沸15min后获得的样品中，仍然含有一些活的菌种，原因是煮沸消毒法不能杀死细菌的全部芽孢和孢子．
（2）图中将菌种接种到平板1的方法是稀释涂布平板法；将菌种接种到平板2之前，接种工具常用灼烧灭菌（灼烧）法进行灭菌．为了逐步分离、纯化得到目的菌种，平板1和平板2中的培养类型都应该属于选择培养基．对于使用频繁的菌种可接种到上图试管中的固体斜面培养基上临时保藏．
（3）用稀释涂布平板法在5个平板上都接种稀释倍数为10⁴的样品液0.1mL，培养一段时间后，平板长出来的菌落数分别为182、160、168、175和190，据此推测，每mL样品液中的细菌数量为1.75×10⁷个．稀释涂布平板法能够通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数目，原因是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．

Answer 1

分析 1、无菌技术的主要内容：
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触．
2、消毒和灭菌：

比较项目	理化因素的作用强度	消灭微生物的数量	芽孢和孢子能否被消灭
消毒	较为温和	部分生活状态的微生物	不能
灭菌	强烈	全部微生 物	能

3、微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答 解：（1）煮沸消毒法不能杀死细菌的全部芽孢和孢子，因此土壤表层泥土稀释液煮沸15min后获得的样品中，仍然含有一些活的菌种．
（2）分析图解可知，图示平板1利用涂布棒进行涂布稀释，即图中将菌种接种到平板1的方法为稀释涂布平板法；将菌种接种到平板2之前，接种工具常用灼烧灭菌（灼烧）法进行灭菌．为了逐步分离、纯化得到目的菌种，平板1和平板2中的培养类型都应该属于选择培养基．对于使用频繁的菌种可接种到上图试管中的固体斜面培养基上临时保藏．
（3）用稀释涂布平板法在5个平板上都接种稀释倍数为10⁴的样品液0.1mL，培养一段时间后，平板长出来的菌落数分别为182、160、168、175和190，据此推测，每mL样品液中的细菌数量=（182+160+168+175+190）÷5÷0.1×10⁴=1.75×10⁷个．当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，因此稀释涂布平板法能够通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数目．
故答案为：
（1）煮沸消毒法不能杀死细菌的全部芽孢和孢子
（2）稀释涂布平板法      灼烧灭菌（灼烧）   选择   固体斜面
（3）1.75×10⁷   当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌

点评 本题考查了微生物分离与培养的有关知识，要求考生能够掌握培养基的类型和功能，识记灭菌和消毒概念的区别，掌握平板划线法和稀释涂布平板法的相关操作步骤，再结合所学知识准确答题．