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【题目】PCR技术现在已经应用到临床诊断、法医鉴定、分子生物学、农牧业等领域。凡是涉及到DNA分子操作的研究工作,几乎都需要用到PCR技术。下图为某同学实验中,所用引物与模板配对情况。回答相关问题:

(1)在DNA复制中引物所起的作用是________。若所用引物为Ⅰ和Ⅱ进行扩增可以获得______种序列不同的产物;若用引物Ⅱ和Ⅲ可以获得_______种序列不同的产物。

(2)PCR技术中,复性是指引物结合到互补DNA链。复性温度过高会引起碱基之间的氢键断裂,导致______牢固结合,DNA扩增效率下降;复性温度过低会造成引物与模板的结合位点____________(填“增加”或“减少”),非特异性产物增加。

(3)利用DNA的哪一特点进行DNA含量的测定?_________________

【答案】 使DNA聚合酶能够从引物的3ˊ端开始连接脱氧核苷酸 2 5 引物不能与互补DNA链(模板) 增加 DNA在260nm 的紫外线波段有一强烈的吸收峰

【解析】试题分析:明确PCR的原理、过程等相关知识,形成清晰的知识网络,据此,从题意和图示中提取有效信息,进行相关问题的解答。

(1) DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,而只能从DNA的3ˊ端延伸DNA链,因此在DNA复制中引物所起的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3ˊ端开始连接脱氧核苷酸。 DNA的合成方向总是从子链的5ˊ端向3ˊ端延伸。 若所用引物为Ⅰ和Ⅱ进行扩增,则新形成的DNA子链中不存在与引物Ⅰ和Ⅱ互补配对的碱基序列,因此可以获得2种序列不同的产物。若用引物Ⅱ和Ⅲ进行扩增,因新形成的DNA子链中,有的含有与引物Ⅱ互补配对的碱基序列,有的含有与引物Ⅲ互补配对的碱基序列,则至少在连续扩增3次后可以获得如下图所示的5种序列不同的产物(蓝色的线段表示扩增过程中新形成的DNA子链,Ⅱ和Ⅲ表示引物)。

(2) PCR技术中,复性是指引物结合到互补DNA链。复性温度过高会引起碱基之间的氢键断裂,导致引物不能与互补DNA链(模板)牢固结合,DNA扩增效率下降;复性温度过低可造成引物与模板错配,导致引物与模板的结合位点增加,非特异性产物增加

(3) DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,峰值的大小与DNA 的含量有关。可以利用DNA的这一特点进行DNA含量的测定

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