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    3．某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因．利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题．

    （1）抗盐某因是否在烟草细胞中稳定遗传的关键是抗盐基因（目的基因）是否插入到烟草的染色体DNA上．
    （2）在构建重组质粒时，应选用HindⅢ和SalⅠ两种酶对目的基因和质粒进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．
    （3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法．含有目的基因的农杆菌可根据标记基因进行筛选．若农杆菌在含有氨苄青霉素和四环素的培养基上都可以生长繁殖，农杆菌中是否己含有目的基因？否（是/否）．为什么？含有目的基因的质粒抗四环素的基因被破坏．
    （4）愈伤组织经再分化形成完整植株，这一过程需要再转接到分化培养基上进行培养，该过程的实质是基因的选择性表达．

    分析 分析题图：图示表示转基因抗盐烟草的培育过程，包括获取目的基因、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定，最后还需要采用植物组织培养技术将转基因植物细胞培育成转基因植株．

    解答 解：（1）抗盐某因是否在烟草细胞中稳定遗传的关键是抗盐基因（目的基因）是否插入到烟草的染色体DNA上．
    （2）质粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三种限制酶切割位点，其中BamHI的切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因；若只用SalI一种限制酶切割可能会导致目的基因与运载体反向连接；因此在构建重组质粒时，应选用SalI和HindIII两种限制酶对质粒和含有抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．
    （3）构建基因表达载体时，抗四环素基因被破坏，但抗氨苄青霉素的基因没有被破坏，因此含有重组质粒的农杆菌在含有四环素的培养基上不能生存，但在含有氨苄青霉素的培养基上能生存．
    （4）植物组织培养包括脱分化和再分化两个阶段，脱分化形成的愈伤组织需经再分化形成完整植株，这一过程需要再转接到分化培养基上进行培养；细胞分化的实质是基因的选择性表达．
    故答案为：
    （1）抗盐基因（目的基因）是否插入到烟草的染色体DNA上
    （2）HindⅢSalⅠ
    （3）否   含有目的基因的质粒抗四环素的基因被破坏
    （4）再分化    分化   基因的选择性表达

    点评 本题结合转基因抗盐烟草的培育过程图，考查基因工程、植物组织培养等知识，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，能根据图中限制酶的位置及题干要求选择正确的限制酶；能根据题中信息判断培养基中抗生素的名称；识记植物组织培养过程及条件．

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