Question

20．在培育转基因烟草过程中，下列操作错误的是（　　）

• A． 用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸
• B． 用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和运载体
• C． 将重组DNA分子导入烟草细胞
• D． 用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：A、限制性核酸内切酶只能切割特定的脱氧核苷酸序列，而烟草花叶病毒的核酸是核糖核酸，且为单链，A错误；
B、构建基因表达载体时，需要用限制酶切割得到抗除草剂基因和切开载体，再用DNA连接酶将两者连接形成重组DNA，B正确；
C、基因表达载体构建好之后，需要将重组DNA分子导入受体细胞（烟草原生质体），C正确；
D、基因工程的最后一步是目的基因的检测和鉴定，可以用含有除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞，D正确．
故选：A．

点评 本题考查基因工程相关知识，包括基因工程的工具、操作步骤等知识点，相关内容不仅需要考生识记，还需要考生理解，特别是A选项，要求考生掌握限制酶的特点，明确限制酶只能切割特定的脱氧核苷酸序列，不能切割核糖核苷酸序列．