Question

【题目】（一）纯化分离细菌的一般步骤如下图所示：

（1）若分离以尿素为氮源的菌种，培养基中通常加入的凝固剂是_____，用于尿素溶液灭菌的工具是_____。若要对分离的菌种进行计数，步骤X是______方法。

（2）若分离醋化醋杆菌得到如图所示的结果，那么步骤X需在_____条件下，用______(工具)完成接种。

（3）为了增加纯化分离的醋化醋杆数量，需要对其进行______，获得的菌种可用于制作果醋，将菌种以_______法固定在木屑上，有利于醋酸发酵的进行。

（二）细胞内核苷酸的形成途径有两种。途径1：利用磷酸、核糖、氨基酸、CO2和NH3等化合物合成。途径2：利用次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成。氨基蝶呤可阻断途径1。正常的脾细胞核苷酸合成的两条途径都存在，但在培养基中仅存活5~7天，实验所用的骨髓瘤细胞是途径2缺陷型细胞。请回答：

（1）用于制备单克隆抗体的脾细胞是从经过______的小鼠体内获得，与筛选出的小鼠骨髓瘤细胞用______处理诱导融合。

（2）经诱导后，考虑细胞两两融合有3种类型，为了筛选出杂交瘤细胞，需在培养基中加入的特殊物质有____，然后培养____天以上，从而达到筛选目的。筛选出的杂交瘤细胞具有_____特点。

（3）筛选出阳性杂交瘤细胞进行两次克隆培养，为提高细胞克隆的形成率，应在培养中加入用射线照射失去_____能力的小鼠成纤维细胞以支持生长。

（4）克隆形成的符合要求的杂交瘤细胞，在小鼠体内或体外培养，可获得抗体。经纯化后的抗体应在 _____条件下保存，使其较长时间内保持活性。

Answer 1

【答案】琼脂糖 G6玻璃砂漏斗 涂布分离 无菌 接种环 扩大培养 吸附 免疫 （灭活的）仙台病毒或聚乙二醇或低压交流电场 次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷、氨基蝶呤 7 既能无限增殖又能产生抗体 增殖 4℃或低温

【解析】

培养基按物理性质分可分固体培养基和液体培养基，液体培养基中加入凝固剂可以制成固体培养基，常用的凝固剂是琼脂或琼脂糖，分离以尿素为唯一氮源的微生物时应以琼脂糖为凝固剂，因为琼脂是混合物，含有N。微生物常用接种方法有平板划线法和稀释涂布分离法，其中平板划线法更易获得单菌落，稀释涂布分离法适合用于微生物计数。动物细胞融合的主要应用是制备单克隆抗体，单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。正常的脾细胞核苷酸合成的两条途径都存在但不能无限增殖，仅存活5~7天，且途径1可被氨基蝶呤阻断，骨髓瘤细胞是途径2缺陷型细胞即能利用次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核苷酸，在特定培养基上要选择保留杂交瘤细胞，则培养基中要加入次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷、氨基蝶呤，以阻断途径1，据此分析。

（一）（1）若分离以尿素为氮源的菌种，应配置以尿素为唯一氮源的培养基，因此培养基中通常加入的凝固剂是琼脂糖，用于尿素溶液灭菌的工具是G6玻璃砂漏斗。若要对分离的菌种进行计数，步骤X是稀释涂布分离法。

（2）若分离醋化醋杆菌得到如右图所示的结果，那么步骤X需在无菌条件下，用接种环完成接种。

（3）为了增加纯化分离的醋化醋杆数量，需要对其进行扩大培养，获得的菌种可用于制作果醋，将菌种以吸附法固定在木屑上，有利于醋酸发酵的进行。

（二）（1）用于制备单克隆抗体的脾细胞是从经过免疫的小鼠体内获得，与筛选出的小鼠骨髓瘤细胞用（灭活的）仙台病毒或聚乙二醇或电刺激处理诱导融合。

（2）经诱导后，考虑细胞两两融合有3种类型，为了筛选出杂交瘤细胞，需在培养基中加入的特殊物质有次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷、氨基蝶呤，然后培养7天以上，从而达到筛选目的。筛选出的杂交瘤细胞具有既能无限增殖又能产生抗体特点。

（3）筛选出阳性杂交瘤细胞进行两次克隆培养，为提高细胞克隆的形成率，应在培养中加入用射线照射失去增殖能力的小鼠成纤维细胞以支持生长。

（4）克隆形成的符合要求的杂交瘤细胞，在小鼠体内或体外培养，可获得抗体。经纯化后的抗体应在4℃或低温条件下保存，使其较长时间内保持活性。