Question

【题目】下图是绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图同答：

（1）(科学家获取绿色荧光蛋白基因所选用的限制酶是________，最终获得的绿色荧光蛋白基因的末端类型属于___________。

（2）构建重组质粒的目的是__________________________。为此，在重组质粒中，除了绿色荧光蛋白基因和复制原点外，还应有___________。

（3）将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞，常用的方法是________。

（4）图中的猪卵母细胞一般处在________期，常通过________（物理方法）对重组细胞进行激活，使其完成减数分裂和发育进程。

Answer 1

【答案】PstⅠ和EcoRⅠ 黏性末端使绿色荧光蛋白基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代，同时能够表达和发挥作用启动子、终止子和标记基因显微注射法MⅡ中（减数第二次分裂中）电脉冲（或电刺激）

【解析】

分析题图，图示为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，其中①表示从水母中获取目的基因（绿色荧光蛋白基因）的过程；②表示基因表达载体的构建过程；③表示将目的基因导入受体细胞的过程；④表示提取体细胞核的过程；⑤表示去掉卵母细胞的细胞核的过程，⑥表示核移植过程；⑦表示早期胚胎培养过程；⑧表示胚胎移植过程。

（1）据图分析，若使用SmaⅠ限制酶，会破坏目的基因，因此获取绿色荧光蛋白基因所运用的限制酶应是图中所示的PstⅠ和EcoRⅠ。根据获得的绿色荧光蛋白基因的末端特点可知其属于黏性末端。

（2）基因工程中，构建重组质粒的目的是使绿色荧光蛋白基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代，同时能够表达和发挥作用；重组质粒的组成成分包括目的基因（绿色荧光蛋白基因）、标记基因、复制原点、启动子和终止子。

（3）将目的基因导入猪胎儿成纤维细胞（动物细胞）常用显微注射法。

（4）作为受体细胞的去核卵母细胞一般处在减数第二次分裂中期，常通过电脉冲刺激进行激活，使其完成减数分裂和发育进程。