Question

6．在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长．如图为获得抗虫棉技术流程．请据图回答：

（1）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定．
（2）A过程需要的酶有限制酶和DNA连接酶．
（3）要把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用Ca²⁺处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为感受态；然后将重组质粒和感受态细胞在缓冲液中混合培养完成转化过程．
（4）含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后，将离体棉花叶片组织培养成再生植株要经过[C]脱分化和[E]再分化．如要确保再生植株中含有抗虫基因，可在C过程的培养基中加入卡那霉素．

Answer 1

分析 分析题图：图示为利用生物技术获得生物新品种的过程示意图，其中A表示基因表达载体的构建过程；B表示用选择培养基筛选含有重组质粒的土壤农杆菌的过程；C表示脱分化过程；D表示愈伤组织，E表示再分化．

解答 解：（1）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定．
（2）图中A为基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒．
（3）要把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用Ca²⁺处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为感受态；然后将重组质粒和感受态细胞在缓冲液中混合培养完成转化过程．
（4）植物组织培养包括脱分化和再分化过程，即图中C表示脱分化过程；D表示愈伤组织，E表示再分化．图中标记基因是卡那霉素抗性基因，因此C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入卡那霉素，以淘汰不含重组质粒的细胞．
故答案为：
（1）基因表达载体的构建　目的基因的检测与鉴定
（2）限制酶　DNA连接酶
（3）Ca²⁺   感受　重组质粒和感受态细胞
（4）脱分化　再分化　卡那霉素

点评 本题结合转基因抗虫植株的培育过程图，考查基因工程和植物组织培养的相关知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，能准确判断图中各过程的名称；识记植物组织培养的过程及应用，能结合图中信息答题．