Question

16．加利福尼亚大学的一组科学家通过基因工程技术成功地将萤火虫的荧光素酶基因导入到大肠杆菌体内．
（1）在基因工程中，获得目的基因通常有两种途径，在此基因工程中，获得目的基因最可能的途径是人工合成法，在此过程中需要使用DNA聚合酶和逆（反）转录酶．
（2）将目的基因导入大肠杆菌需要运载体的帮助．作为运载体需具备的条件有ABD．
A．能够在宿主细胞内复制并稳定保存
B．具有特定的限制酶切点
C．具有与目的基因相同的碱基片断
D．具有某些标记基因
（3）培育能发荧光的植物是生物工程学家的美好愿望之一．如果利用基因工程技术将荧光素酶基因成功导入植物细胞，并能够表达，请问如何才能培育成能发荧光的植物幼苗？利用组织培养技术简述培育过程．先通过脱分化，得到愈伤组织，再通过再分化诱导生根生芽，得到植物苗．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
4、目的基因的检测与鉴定：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）获得真核生物的目的基因最好采用人工合成法，即以mRNA为模板逆转录形成DNA，该过程需要DNA聚合酶和逆转录酶．
（2）作为基因工程的运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来．故选：ABD．
（3）将转基因植物细胞培育成转基因植株需要采用植物组织培养技术，其过程为：先通过脱分化，得到愈伤组织，再通过再分化诱导生根生芽，得到植物苗．
故答案为：
（1）人工合成法      DNA聚合酶     逆（反）转录
（2）ABD
（3）利用组织培养技术      先通过脱分化，得到愈伤组织，再通过再分化诱导生根生芽，得到植物苗

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理，掌握基因工程的工具及作用以及基因工程的具体操作步骤，能结合所学的知识转答题，属于考纲识记和理解层次的考查．