[题目]基因检测是指通过检测生物体中的DNA序列.以了解生物体基因状况的技术手段.Sanger双脱氧链终止法是DNA测序的基本方法.其原理是:核酸模板在核酸聚合酶.带有3′-OH末端的单链核苷酸引物.四种dNTP存在的条件下复制或转录时.如果在反应系统中分别引人单一种类的ddNTP(即2.3双脱氧核苷三磷酸.在脱氧核糖的3′位置缺少一个羟基.故不能同后续� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】基因检测是指通过检测生物体中的DNA序列，以了解生物体基因状况的技术手段。Sanger双脱氧链终止法是DNA测序的基本方法，其原理是:核酸模板在核酸聚合酶、带有3′-OH末端的单链核苷酸引物、四种dNTP存在的条件下复制或转录时，如果在反应系统中分别引人单一种类的ddNTP（即2、3双脱氧核苷三磷酸，在脱氧核糖的3′位置缺少一个羟基，故不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键），只要ddNTP掺入链端，该链就停止延长，链端掺入dNTP的片段可继续延长。通过电泳将不同长度的片段分开，DNA片段越小，距离起点越远，根据末端核苷酸可得到原始序列信息。具体流程图如下。

（1）若待测核酸模板为双链DNA，首先要作____________处理，与引物结合后，在DNA聚合酶作用下子链沿____________方向（填“5′端向3′端”或“3′端向5′端”）进行延伸反应。若待测核酸模板为RNA，则需要在____________酶的帮助下合成DNA单链片段。

（2）ddNTP为2，3-双脱氧核苷三磷酸，只要ddNTP掺入链端，该链就停止延长的原因是____________。

（3）假设某反应体系中，待测DNA单链序列3′GTACCGTA5′，加入4种dNTP和ddATP，经过双脱氧链终止法处理，会得到____________种片段，其中最短的片段序列是____________。

（4）假设某次Sanger双脱氧链终止法测序得到的电泳图如上图所示，则待测DNA序列从5′端到3′端为____________。

【答案】变性从5′端向3′端逆转录酶 3号碳上不是羟基，不能与下一个脱氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯键 3 CddA ATGGTCATCA

【解析】

读取信息“在反应系统中分别引人单一种类的ddNTP（即2、3双脱氧核苷三磷酸，在脱氧核糖的3′位置缺少一个羟基，故不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键），只要ddNTP掺入链端，该链就停止延长，链端掺入dNTP的片段可继续延长”“DNA片段越小，距离起点越远，根据末端核苷酸可得到原始序列信息”进行解答。

（1）测定双链DNA的序列需要将DNA进行变性处理，获得单链DNA分子；由于引物是3′-OH末端的单链核苷酸，所以子链沿着5′端向3′端进行延伸反应；利用RNA获得DNA单链的过程是逆转录，所以需要逆转录酶。

（2）根据题干信息，ddNTP为2，3-双脱氧核苷三磷酸其3号碳上不是羟基，不能与下一个脱氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯键，所以只要ddNTP掺入链端，该链就停止延长。

（3）ddATP带有碱基腺嘌呤，和胸腺嘧啶配对，从5′端向3′端延伸，由于待测序列含有2个胸腺嘧啶，所以可以获得5′CddA3′，5′CATGGCddA3′，5′CATGGCAT3′共3种片段，最短的序列是CddA。

（4）根据题干信息“DNA片段越小，距离起点越远，根据末端核苷酸可得到原始序列信息”根据电泳序列，使用ddT获得了3个片段，其中有最小的和最大片段，因此该DNA序列的第一个和最后一个碱基都是A；按照碱基互补配对的原则，获得序列ATGGTCATCA。

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物种	I	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ
生物量（g·m-2）	134	321	35	175

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B.图1涉及的营养级共4个，其中第1营养级到第2营养级的传递效率约为10.7%

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（3）将C3植物和C4植物黑暗处理24小时，再进行一小段时间的光照，经脱色处理后，再用碘液对C3植物和C4植物的叶肉细胞和维管束鞘细胞染色，出现蓝色的细胞有____________。

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