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【题目】图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG.请回答下列问题:

(1)基因工程的核心步骤是______________

(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段,产生的末端是__末端。

(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T﹣A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d.从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,产物中共有__种不同DNA片段.

(4)在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加__的培养基进行培养.

(5)启动子是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端,它是__识别与结合的位点,促进转录的开始.

【答案】基因表达载体的构建 4 抗生素B RNA聚合酶

【解析】

根据题干信息和图形分析可知,外源DNA含有MspⅠ、BamHIMboISmaI4种限制性核酸内切酶的识别序列,其中限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位点在目的基因D上;质粒含有MspⅠ、MspIBamHIMboI4种限制性核酸内切酶的识别序列,其中BamHI酶的切割位点位于抗生素A的抗性基因上;MboI酶的切割位点位于抗生素B和抗生素A的抗性基因上。

1)基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤。

(2)SmaⅠ识别和切割位点是CCC↓GGG,因此若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段,产生的末端是平末端。

(3)根据题意分析,杂合子的基因型为Dd,其中D基因片段有两个SmaⅠ酶切位点,完全切割后出现三个片段长度分别是534+3=537bp、796-3-3=790bp、658+3=661bp,发生基因突变后的d基因片段只有一个SmaⅠ酶切位点,完全切割后出现两个片段长度分别是1327bp、661bp,所以从杂合子中分离的DNA片段被限制酶SmaⅠ完全切割后形成会四种不同的DNA片段。

4)用限制酶BamHⅠ切割质粒会破坏抗生素A抗性基因,但不会破坏抗生素B抗性基因,所以导入重组质粒的大肠杆菌能在含有抗生素B的培养基上生存,因此为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加抗生素B的培养基培养。

(5)基因表达载体上的启动子是RNA聚合酶的结合位点。

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C. 14

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