Question

【题目】GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：

（1）完成图中A过程必需的工具是 ；该基因治疗的受体细胞为 。

（2）若要构建含GDNF基因的表达载体，则需选择图中的 限制酶进行酶切。

（3）如下图表示四种质粒，其中，箭头所指部位为酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示GDNF基因运载体的是 。

（4）下列有关限制性核酸内切酶和质粒运载体的描述，错误的是______（多选）

A．限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列

B．限制性核酸内切酶的作用部位与RNA聚合酶的完全相同

C．使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解

D．质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的

（5）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图所示，且载体大小为6000bp）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，若是正向连接的重组载体，其产生的酶切片段数为 个，反向连接的重组载体产生片段有 （多选）。

①100bp ②200bp ③600bp ④700bp ⑤6000bp ⑥6500bp

Answer 1

【答案】

（1）限制酶（限制性核酸内切酶）和DNA连接酶 （大鼠）神经干细胞

（2）XhoⅠ

（3）A

（4）ABD

（5）2 ②⑥

【解析】

试题分析：

（1）A过程表示目的基因的获取与基因表达载体的构建需要用限制酶和DNA连接酶；研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。

（2）要构建含GDNF基因的表达载体，应用XhoⅠ限制酶，其可以保证目的基因完整。

（3）运载体要有限制酶切割位点，保证目的基因能插入，同时不能破坏标记基因，因此选A。

（4）限制性核酸内切酶能识别DNA，能识别特定的核苷酸序列，A错误；限制性核酸内切酶能识别特定的核苷酸序列，而RNA聚合酶识别的是启动子，B错误；质粒是原核生物中除拟核之外的能独立复制的DNA，病毒中没有，D错误。

（5）正向链接的表达载体上有HpaI酶和BamHI酶两个切割位点，切割后形成两个片段；质粒和目的基因反向连接后的基因表达载体的大小为6700bp，HpaI酶和BamHI酶切割位点之间的长度为200bp，则剩余片段大小为6500bp。