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10.图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG.请回答下列问题:

(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接.
(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段,产生的末端是平末端,其产物长度为537bp、790bp、661bp.
(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d.从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,产物中共有4种不同DNA片段.
(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是BamHⅠ.在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加抗生素B的培养基进行培养.经检测,部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达,其最可能的原因是同种限制酶切割形成的末端相同,部分目的基因D与质粒反向连接.

分析 分析题图:外源DNA含有BamHI、MboI、SmaI 3种限制性核酸内切酶的识别序列,其中限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位点在目的基因上.质粒含有MspI、BamHI、MboI3种限制性核酸内切酶的识别序列,其中BamHI酶的切割位点位于抗生素A的抗性基因上;MboI酶的切割位点位于抗生素B和抗生素A的抗性基因上.

解答 解:(1)一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接.
(2)限制酶SmaⅠ的酶切位点是CCC↓GGG,其切割产生的是平末端.图1中DNA片段含有两个SmaⅠ酶切位点,被SmaⅠ酶完全切割后出现三个长度的片段,分别是537bp、790bp、661bp.
(3)杂合子的基因型为Dd,其中D基因片段有两个SmaⅠ酶切位点,完全切割后出现三个片段长度分别是537bp、790bp、661bp,发生基因突变后的d基因片段只有一个SmaⅠ酶切位点,完全切割后出现两个片段长度分别是1327bp、661bp,所以从杂合子中分离的DNA片段被限制酶SmaⅠ完全切割后形成会四种不同的DNA片段.
(4)限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位点位于目的基因D上,若用这两种酶切割会被破坏目的基因D;运载体的两个标记基因上都有限制酶MboⅠ的切割位点,用该酶切割会破坏这两个标记基因,因此只能选用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和运载体.用限制酶BamHⅠ切割质粒会破坏抗生素A抗性基因,但不会破坏抗生素B抗性基因,所以导入重组质粒的大肠杆菌能在含有抗生素B的培养基上生存,因此为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加抗生素B的培养基培养.由于同种限制酶切割形成的末端相同,部分目的基因D与质粒反向连接,这样会导致部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达.
故答案为:
(1)脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖
(2)平         537bp、790bp、661bp
(3)4
(4)BamHⅠ抗生素B   同种限制酶切割形成的末端相同,部分目的基因D与质粒反向连接

点评 本题结合基因结构图和运载体结构图,考查基因工程的技术和原理,要求考生认真分析图1和图2,根据图1中信息计算限制酶SmaⅠ切割产生的片段的种类及长度;根据图1和图2中限制酶的给切割位点,明确构建基因表达载体只能用限制酶BamHⅠ,再运用所学的知识答题即可.

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