Question

20．微生物培养技术在医疗、工业生产、食品生产等方面均有应用．如表是一种培养基的配方，请回答：

牛 肉 膏	蛋 白 胨	NaCl	琼  脂	水
0.5g	1g	0.5g	2g	200ml

（1）此培养基中的蛋白胨主要为微生物提供碳源、氮源和生长因子．在各种成分溶化后分装前，必须进行的是调节pH和灭菌．
（2）临床使用抗生素前，有时需要进行细菌的耐药性试验，其大致过程是：将含有某种细菌的菌液用稀释涂布平板法接种在培养基表面并进行培养，最终形成单个的菌落；再分别将含有等剂量不同种抗生素的相同大小的圆形滤纸片置于该平板上有菌落的位置，继续培养一段时间后，若滤纸片下的菌落死亡，说明该细菌对该抗生素敏感．（填“敏感”或“不敏感”）
（3）用上述方法统计菌落数目时，一般选择菌落在30-300的平板进行计数，在某一稀释度下平板上的平均菌落数为50个，所用稀释液的体积为0.2ml，稀释倍数为10⁵时，则每毫升样品中的菌落数为2.5×10⁷．在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落．A同学的实验结果产生的原因可能有①②③（填序号）．
①由于土样不同　②由于培养基污染　③由于操作失误　④没有设置对照
（4）在筛选纤维素分解菌的过程中，通常用刚果红染色法，这种方法能够通过颜色反应直接对纤维素分解菌进行筛选．甲同学在实验时得到了如图所示的结果，则纤维素分解菌位于A．
A．③B．①②C．②③D．①②③

Answer 1

分析 1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，其基本过程为计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板五个步骤．
2、从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株．筛选尿素分解菌应该使用以尿素为唯一氮源的选择培养基，配制培养基的一般操作是配制培养液、调整pH、分装、包扎、灭菌、搁置斜面．微生物的计数常用稀释涂布平板法接种，采用固体平板培养细菌时，要将培养皿倒置．

解答 解：（1）培养基中的蛋白胨主要为微生物提供碳源、氮源和生长因子．在各种成分溶化后分装前，必须进行的是调节pH和灭菌．
（2）临床使用抗生素前，有时需要进行细菌的耐药性试验，其大致过程是：将含有某种细菌的菌液用稀释涂布平板法接种在培养基表面并进行培养，最终形成单个的菌落；再分别将含有等剂量不同种抗生素的相同大小的圆形滤纸片置于该平板上有菌落的位置，继续培养一段时间后，若滤纸片下的菌落死亡，说明该细菌对该抗生素敏感．
（3）（3）微生物的计数常用稀释涂布平板法接种，可以获得单个菌落进行统计菌落数目，通常选择菌落数在30～300间的平板进行计数．每毫升样品中的菌落数为50÷0.2×10⁵=2.5×10⁷．在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落．A同学的实验结果产生的原因可能有①由于土样不同、②由于培养基污染、③由于操作失误，是否设置对照实验不影响实验组的菌落数目．
（4）刚果红是一种染料，可与纤维素形成红色复合物，但不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应，在含有纤维素的培养基上添加刚果红时，会形成红色复合物，当纤维素被分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，据此就可以筛选出纤维素分解菌．据图分析：图中③以纤维素分解菌为中心的透明圈，所以纤维素分解菌位于其内，故选：A．
故答案为：
（1）碳源、氮源和生长因子        调节pH
（2）稀释涂布平板        敏感
（3）30-300        2.5×10⁷        ①②③
（4）刚果红染色       A

点评 本题主要考查微生物的筛选与分离，培养基的制作过程等知识，意在提高学生对相关知识点的识记与理解．