[题目]我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛.下图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的示意图.图中质粒表示基因工程中经常选用的载体-pBR322质粒.Ampr表示青霉素抗性基因.Tetr表示四环素抗性基因.根据上图回答下列问题(限制酶PstⅠ.EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同):(1)过程②必需的酶是 .过程④必需的酶是 .⑤� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的示意图。图中质粒表示基因工程中经常选用的载体—pBR322质粒，Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。根据上图回答下列问题（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：

（1）过程②必需的酶是，过程④必需的酶是。⑤过程中为提高成功率，常用溶液处理大肠杆菌。

（2）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒pBR322进行切割，用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时，则形成的DNA片段共种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段的比例是。

（3）如果只用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌（不含Ampr、Tetr抗性质粒）先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。接种到甲培养基上的目的是筛选的大肠杆菌，含有目的基因的大肠杆菌在乙、丙培养基上的存活状态分别是，。

【答案】

（1）(逆)反转录酶 DNA连接酶 CaCl2 （2）9 1/3

（3）含四环素抗性基因在乙中不能存活在丙中存活

【解析】

试题分析：（1）过程②人生长激素信使RNA形成cDNA，表示逆转录，需要逆转录酶；过程④质粒和基因连接形成重组质粒．需要DNA连接酶发挥作用；⑤过程为转化，需要CaCl2使大肠杆菌处于易于吸收外界DNA的感受态。（2）PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ分3种酶分别用1，2，3表示，一种酶酶切时，一共可以得到3种不同长片段；两种酶酶切时，可得到1-2，2-1，2-3，3-2，1-3，3-1六种片段；三种酶酶切，可得到1-2，2-3，3-1三种片段，与前面重复，因此一种可形成9种片段，其中含有完整四环素抗性的有3种，单独用1酶切，单独用2酶切，1和2同时酶切得到的片段，占总数的1/3。（3）在甲中能生长的是具有四环素抗性的细菌，含有四环素抗性基因；与丙相比，乙培养基中少了两个菌落，说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌成功导入了重组质粒，而且目的基因插入质粒后，破坏了青霉素抗性基因，使含有目的基因的大肠杆菌不能在含有青霉素的乙培养基上生长，但四环素基因是完好的，则含有目的基因的大肠杆菌能在含有四环素的丙培养基上生长。

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