Question

7．我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成分是乙肝表面抗原蛋白，如图是将乙肝表面抗原基因转移到烟草细胞内生产乙肝疫苗的示意图，请据图回答：

（1）过程①表示基因表达载体的构建，为了使目的基因正常表达，其首端必须有RNA聚合酶识别和结合的部位，若限制酶切出了平末端，要选择T₄DNA连接酶 （进行连接．
（2）目的基因通过过程②进入农杆菌细胞内，并在农杆菌细胞内维持稳定和表达的过程称为转化
（3）将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞的方法称为农杆菌转化法．
（4）将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞后，需要进行基因的检测与鉴定：首先检测烟草细胞的染色体DNA上是否插入了乙肝表面抗原基因，其次检测乙肝表面抗原基因是否转录处相应的mRNA；最后检测乙肝表面抗原基因是否翻译出乙肝抗原蛋白，检测的方法是抗原-抗体杂交．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：
①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；
②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；
③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
图示中①为基因表达载体的构建，②为目的基因的导入过程．

解答 解：（1）据图示可知，过程①表示基因表达载体的构建，启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，RNA聚合酶与其结合后可以驱动基因的转录．为了使目的基因正常表达，其首端必须有RNA聚合酶识别和结合的部位，即启动子，若限制酶切出了平末端，要选择T₄DNA连接酶进行连接．
（2）转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程；故目的基因通过过程②进入农杆菌细胞内，并在农杆菌细胞内维持稳定和表达的过程称为转化 
（3）将目的基因进入植物细胞常用的方法是农杆菌转化法，故将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞的方法称为农杆菌转化法．
（4）目的基因的检测与表达：分子水平的检测有DNA分子杂交技术检测目的基因存在、分子杂交技术检测是否转录、抗原抗体杂交技术检测基因是否表达，还有个体水平的检测等；故将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞后，需要进行基因的检测与鉴定：首先检测烟草细胞的染色体DNA上是否插入了乙肝表面抗原基因，其次检测乙肝表面抗原基因是否转录处相应的mRNA；最后检测乙肝表面抗原基因是否翻译出乙肝抗原蛋白，检测的方法是抗原-抗体杂交．
故答案为：
（1）基因表达载体的构建  RNA聚合酶 T₄DNA连接酶 
（2）转化 
（3）农杆菌转化法 
（4）烟草细胞的染色体DNA上  乙肝表面抗原基因  抗原-抗体杂交

点评 本题考查了基因工程的有关知识，要求考生掌握基因工程中目的基因检测与鉴定的方法，能够根据题意判断个步骤的名称和操作，难度中等．