Question

12．人外周血单核细胞能合成白介素2（IL-2）．该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易被降解．研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白．其技术流程如图．请回答：
（1）图中②表示反（或逆）转录过程．
（2）表达载体1中的位点a，应为限制酶BglⅡ的识别位点，才能成功构建表达载体2．
（3）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL-2蛋白对应的碱基序列不能含有终止（起始、终止）密码子，才能成功表达出IL-2-HSA融合蛋白．
（4）应用分子杂交技术可检测酵母菌是否转录出IL-2-HAS的mRNA．

Answer 1

分析 据图分析，①表示转录提取信使RNA，②表示逆转录形成目的基因，③表示基因表达载体的构建．限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因．胚胎移植中受体的子宫不对外来胚胎发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能．对囊胚阶段的胚胎进行分割时要注意将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育．

解答 解：（1）图中②过程mRNA→cDNA，表示逆转录过程．
（2）根据目的基因IL-2cDNA的两端的酶切位点分别是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表达载体1也必须有这两个酶切位点，表达载体1上已有EcoRⅠ，推测位点a应含有BglⅡ．
（3）融合基因转录出的mRNA中与IL-2蛋白对应的碱基序列中不能含有终止密码，才能成功表达出IL-2-HsA融合蛋白．否则HSA蛋白将无法合成．
（4）应用分子杂交技术可检测酵母菌是否转录出IL-2-HAS的mRNA，应用抗原-抗体杂交技术可检测酵母菌是否表达出IL-2-HSA融合蛋白．
故答案为：
（1）反（或逆）转录
（2）a
（3）终止
（4）分子  mRNA

点评 本题结合流程图，考查基因工程的相关知识，要求考生能够识记动物细胞培养的条件；识记基因表达载体的组成；明确启动子和终止子的功能；识记目的基因分子水平检测的方法等．