Question

6．某实验小组对酸奶中乳酸菌的数量进行了测定，取6支灭菌的试管，分别加入9mL灭菌的生理盐水，标号A₁、A₂、A₃、A₄、A₅、A₆，吸取1mL酸奶样液中加入试管A₁中，然后另取一支吸管从A₂中吸取1mL溶液，加入A₂中，依此类推，最后从试管A₆中取0.1mL样液进行涂布计数，涂布三个平板，其菌落数分别为251、265、276个．请回答下列问题：
（1）培养乳酸菌除了必要的营养物质外，还需将培养基的pH调至中性或微碱性．
（2）制备乳酸菌的培养基过程中，对培养皿灭菌的常用方法是干热灭菌法．倒平板时培养基的温度不能太低，原因是温度太低会导致培养基凝固，无法铺展均匀；待平板冷凝后，要将平板倒置，其目的是防止平板冷凝后，培养皿盖上凝结的水珠落入培养基中造成污染．
（3）该实验小组对乳酸菌接种所采用的方法是稀释涂布平板法．根据三个平板中菌落数，可推测原酸奶中乳酸菌的浓度为2.64×10⁹个/mL，该方法测定的乳酸菌的含量和实际值相比，一般偏小（填“偏大”或“偏小”）．
（4）为了使测量结果更加准确，该实验对照组的设置是另增设一组培养基，接种等量灭菌的生理盐水．

Answer 1

分析 1、配制乳酸菌分离培养基：制备该培养基的步骤是：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板．该培养基的化学成分包括碳源、氮源、水、无机盐四类营养成分，在培养该细菌的培养基中还需要添加维生素．培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法．
2、分离微生物常用的方法：
①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面． 
②稀释涂布平板法：将骏业进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养．
其中，稀释涂布平板法还可以用于对微生物进行计数．

解答 解：（1）乳酸菌是一种细菌，制备细菌培养基时，需将培养基的pH调至中性或微碱性．
（2）制备培养基过程中，对培养皿灭菌的常用方法是干热灭菌法．温度太低会导致培养基凝固，无法铺展均匀，因此倒平板时培养基的温度不能太低；待平板冷凝后，要将平板倒置，其目的是防止平板冷凝后，培养皿盖上凝结的水珠落入培养基中造成污染．
（3）取6支灭菌的试管，分别加入9mL灭菌的生理盐水，标号A₁、A₂、A₃、A₄、A₅、A₆，吸取1mL酸奶样液中加入试管A₁中，然后另取一支吸管从A₂中吸取1mL溶液，加入A₂中，依此类推，最后从试管A₆中取0.1mL样液进行涂布计数，这种接种方法是稀释涂布法．根据操作步骤可推知得到10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶倍的稀释液．从试管A₆中取0.1mL样液进行涂布计数，三个平板中菌落数分别为251、265、276个，可推测原酸奶中乳酸菌的浓度为$\frac{251+265+276}{3}×10×1{0}^{6}$=2.64×10⁹个/mL．稀释涂布平板法测定活菌数目时，由于相邻的细菌可能形成一个菌落，因此测定值可能比实际值小．
（4）为了使测量结果更加准确，需要另增设一组培养基，接种等量灭菌的生理盐水．
故答案为：
（1）中性或微碱性
（2）干热灭菌法       温度太低会导致培养基凝固，无法铺展均匀       防止平板冷凝后，培养皿盖上凝结的水珠落入培养基中造成污染
（3）稀释涂布平板法      2.64×10⁹     偏小
（4）另增设一组培养基，接种等量灭菌的生理盐水

点评 本题考查微生物的分离和培养等知识，要求考生识记微生物分离和培养的过程，采用的接种方法等，能结合所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记和理解层次的考查．