Question

【题目】下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。复制原点是质粒能正常复制的必 需组成。图中 Ap 为氨苄青霉素抗性基因，Tc 为四环素抗性基因， lacZ 为蓝色显色基因。 EcoR Ⅰ、 PvuⅠ为相应的限制酶切割位点，括号内的数据是该切点与复制原点的距离，单位为 kb（1 kb= 1000 个碱基对长度）。请回答下列问题：

（1）用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时，应该选择质粒_______，选择的限制酶 是_______。

（2）如果选择的质粒与目的基因重组成功，并且在受体细胞中能正常表达，则所形成的重组质粒 用 EcoRI 完全酶切，并进行电泳观察，可出现的片段长度有_____或______。

（3）将基因表达载体导入大肠杆菌时，可将大肠杆菌先用 处理。导入大肠杆菌后，为了筛选 出含目的基因的大肠杆菌，在普通琼脂培养基中还需加入______，形成的菌落颜色为_______ 。

（4）如果要检测导入目的基因的大肠杆菌是否合成相应的蛋白质，可以采用_____ 法。

Answer 1

【答案】B PvuⅠ 3.6kb、3.1kb或1.1kb、5.6kb Ca2+（或CaCl2） 氨苄青霉素 白色 抗原—抗体杂交

【解析】

分析题图：基因表达载体由启动子、终止子、标记基因和目的基因组成．质粒A中缺少标记基因，质粒C中的复制原点会被酶PvuⅠ切割，所以用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时，应该选择质粒B。

（1）含有目的基因的外源DNA中含有两种限制酶的切割位点，但用限制酶EcoRⅠ切割会破坏目的基因，因此只能选择限制酶PvuⅠ进行切割．质粒A中缺少标记基因，质粒C中的复制原点会被酶PvuⅠ切割，所以用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时，应该选择质粒B。

（2）质粒长度为2.7kb，目的基因长度为4.0kb，所以重组质粒长度为6.7kb，目的基因与运载体重组时可能会正向连接，也可能会反向连接，因此所形成的重组质粒用EcoRⅠ完全酶切，并进行电泳观察，可出现的片段长度有3.6kb、3.1kb或1.1kb、5.6kb。

（3）用限制酶PvuⅠ切割会破坏质粒B中的lcZ基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此导入大肠杆菌后，为了筛选出含目的基因的大肠杆菌，在普通琼脂培养基中还需加入氨苄青霉素，形成的菌落颜色为白色。

（4）检测导入目的基因的大肠杆菌是否合成相应的蛋白质，常采用抗原-抗体杂交法。