利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄．该过程需要用多种限制酶.如图依次表示EcoRⅠ.SmaⅠ.NaeⅠ三种限制酶的识别序列及切割位点．请回答:(1)上述限制酶在特定位点切割DNA.其实质是断开DNA分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切割后产生了黏性末端和平末端末端．(2)利用EcoRⅠ和NAE酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因.可与被EcoR� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

17．利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄．该过程需要用多种限制酶，如图依次表示EcoRⅠ、SmaⅠ、NaeⅠ三种限制酶的识别序列及切割位点．

请回答：
（1）上述限制酶在特定位点切割DNA，其实质是断开DNA分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切割后产生了黏性末端和平末端末端．
（2）利用EcoRⅠ和NAE酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因，可与被EcoRⅠ和SamⅠ酶切后的质料连接成重组质料，原因是相同的黏性末端之间可连接，且不同的平末端之间也可以连接．
（3）重组质料导入番茄后，欲检测抗冻蛋白基因是否转录出mRNA，需利用标记的含有目的基因的DNA片段作探针．
（4）利用抗冻蛋白制备出相应的抗体，然后进行抗原-抗体杂交，观察到杂交带出现，尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功．因此，还应将转基因番茄置于寒冷环境培养，以确定其耐寒能力是否提高．

分析 1、基因工程的基本工具：分子手术刀”--限制性核酸内切酶（限制酶）、“分子缝合针”--DNA连接酶、“分子运输车”--载体．
2、基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的获取，②基因表达载体的构建，③将目的基因导入受体细胞，④目的基因的检测与鉴定．

解答解：（1）限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，产生黏性末端和平末端．
（2）EcoRⅠ酶切出粘性末端，SmaⅠ和NaeⅠ酶切出平末端，利用EcoRⅠ和NAE酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因，可与被EcoRⅠ和SamⅠ酶切后的质料连接成重组质料，原因是相同的黏性末端之间可连接，且不同的平末端之间也可以连接．
（3）欲检测目的基因是否转录出mRNA，需利用标记的含有目的基因的DNA片段作探针，进行核酸分子杂交，若出现杂交带，说明目的基因是否转录出了mRNA．
（4）利用抗冻蛋白制备出相应的抗体，然后进行抗原-抗体杂交，观察到杂交带出现，尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功．因此，还应进行个体生物学水平的鉴定，将转基因番茄置于寒冷环境培养，以确定其耐寒能力是否提高．
故答案为：
（1）磷酸二酯键黏性末端和平末端
（2）相同的黏性末端之间可连接，且不同的平末端之间也可以连接
（3）标记的含有目的基因的DNA片段（或“标记的抗冻蛋白基因”或“标记的含有目的基因的DNA单链”）
（4）抗体置于寒冷环境培养（或进行个体水平检测或进行抗冻实验）

点评本题考查了基因工程的有关知识，要求考生能够掌握基因工程的操作步骤，识记基因工程的操作工具及作用，能够结合图示以及所学知识准确答题，难度适中．

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