Question

10．科学家将人的生长激素基因与pBR322质粒进行重组，导入大肠杆菌中并成功地得以表达．pBR322质粒含有两个抗生素抗性基因和5个限制酶切点（如图2）．请据图回答问题：

（1）图1中①过程获取单链DNA的方法是反转录法．
（2）将目的基因插入到pBR322质粒中，用到的两种工具酶分别是限制酶和DNA连接酶．
（3）将重组质粒导入大肠杆菌的方法是首先用钙离子处理大肠杆菌，使细胞处于感受态，再将重组质粒与感受态大肠杆菌混合，在一定条件下完成转化．
（4）重组质粒形成与否需要鉴定和筛选，方法是将导入重组质粒的大肠杆菌，通过含抗生素的培养基进行培养，观察大肠杆菌的生长、繁殖情况进行判断，如图3所示．如果受体菌在培养基A上能生长、繁殖形成菌落，而不能在培养基B上生长、繁殖，则使用限制酶的切点是图2中的切点3或切点4或切点5，即目的基因插入了抗四环素基因中．

Answer 1

分析 由图可知，①是逆转录，②是获取目的基因，切点1可破坏抗氨苄青霉素基因，切点3、4、5可破坏抗四环素基因，切点2对这两个基因无影响．

解答 解：（1）图1中①过程表示逆转录，即获取单链DNA的方法为反转录法．
（2）将目的基因插入到运载体中，用到的两种工具酶为限制酶和DNA连接酶．
（3）将重组质粒导入大肠杆菌的方法是首先用钙离子处理大肠杆菌，使细胞处于感受态，再将重组质粒与感受态大肠杆菌混合，在一定条件下完成转化．
（4）根据题意，受体菌能在含青霉素的培养基上生存，不能在含四环素的培养基上生存，所以限制酶切点位于四环素基因内部，由图可知，是切点3、4、5．
故答案为：
（1）反转录
（2）限制酶      DNA连接酶
（3）钙离子
（4）切点3或切点4或切点5       抗四环素

点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，掌握目的基因获取的方法，再结合图中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．