用基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质.下列叙述正确的是 [ ] A．通常用鸟枪法直接获得目的基因 B．DNA连接酶和RNA聚合酶是构建重组质粒必需的工具酶 C．可以直接用合成胰岛素的信使RNA作为目的基因 D．导入大肠杆菌的目的基因不一定能成功表达题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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科目：高中生物 来源：佛山市2007年普通高校招生第二次模拟考试生物试题 题型：071

圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。

（1）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：

①分别配置________的培养基和________的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；

②分别向A、B培养基接种________；

③把接种后的培养基放在恒温箱中3d－4d；

④从A、B培养基上生长的________中挑取生长良好的菌株，分别接种到________中；

⑤________。

（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。

①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是________。

此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是________。

②下图为第1轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。

（3）在对固氮基因产物的生产研究中，需要从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质。下图表示蛋白质提取和分离实验涉及的相关原理。

①图甲表示相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶色谱法分离的过程。试管中收集到的液体最先出现的是相对分子质量较大的蛋白质，原因是________。

②图乙所示实验模拟电泳现象，U型管左侧的颜色逐渐变深，原因是________。

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科目：高中生物 来源：2013-2014学年浙江杭州二中高三上期第二次月考生物卷（解析版） 题型：综合题

（10分）2013年初，我国部分地区陷入严重的雾霾和污染天气中，北京的空气污染指数PM2.5曾接近1000。据统计，北京近十年来肺癌患者增加了60%，引起肺癌的因素有多种，如大气污染、吸烟、免疫力降低等。

分析以下材料，回答相关问题：

材料I：某学生研究小组用生理盐水制备香烟浸出液，进行“香烟生理盐水浸出液对大鼠体重影响” 的研究。

（1）将生理状态相似的大鼠随机分为三组，每天同一时间分别对小剂量组和中剂量组按每百克体重1.0ml灌胃不同浓度的香烟生理盐水浸出液，同时对照组按灌胃 _。结果如上图所示。由图可以得出的结论是。

（2）若进一步研究香烟生理盐水浸出液对大鼠身体健康的影响，还需对肝脏病理、肺部纤维增生程度进行检查，可通过细胞培养观察细胞，如果可判断为癌变。

材料II：研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。

该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答。

（3）形成重组载体时，需用酶切割、。

（4）进行过程②时，需用酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

（5）研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是let-7基因通过转录形成miRNA，与RASmRNA通过结合，从而使无法以RASmRNA为模板完成RAS蛋白的合成。抑制肺癌细胞的增殖。

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科目：高中生物 来源： 题型：阅读理解

圆褐固氮菌是自生固氮菌，为经济有效地提高农作物产量，人们一直在努力研究、寻找固氮基因。对基因的研究常常因研究样品中DNA含量太低而难以进行，PCR技术有效地解决了这个问题。如今对基因的深入研究使人类跨入了蛋白组研究时代，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是该研究要做的基本工作之一。

（1）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：

①分别配置的培养基和的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；

②分别向A、B培养基接种；

③把接种后的培养基放在恒温箱中3d—4d；

④从A、B培养基上生长的中挑取生长良好的菌株，分别接种到中；

⑤ 。

（2）用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。

PCR反应体系	50ul
缓冲液	5ul
脱氧核苷酸	1ul
引物A	0.5ul
引物B	0.5ul
DNA聚合酶	0.5U
模板DNA	1-2ul
加去离子水补足至50 ul

反应条件
	温度	时间
变性	95℃	30s
复性	55℃	30s
延伸	72℃	1min
30个循环后	适宜	5-10min
保温	4℃	2h

①从上表中可得出，PCR技术与DNA复制相比较，主要区别之一是。

此外，从反应条件看，所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________ ________________。

②下图为第1轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。

（3）在对固氮基因产物的生产研究中，需要从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质。下图表示蛋白质提取和分离实验涉及的相关原理。

①图甲表示相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶色谱法分离的过程。试管中收集到的液体最先出现的是相对分子质量较大的蛋白质，原因是。

②图乙所示实验模拟电泳现象，U型管左侧的颜色逐渐变深，原因是。

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科目：高中生物 来源： 题型：

人的血清蛋白在临床上需求量很大，它通常是从人的血液中提取出来而获得的。由于艾滋病病毒等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血制品顾虑重重。而基因工程技术的应用，使人类可以从动物体内获得大量的安全优质的血清蛋白。其操作过程主要是将人类血清蛋白基因与病毒DNA构成重组DNA，然后通过显微注射技术将重组DNA转移到奶牛的受精卵中，最后可从该受精卵发育成的雌牛的乳汁中分离出人们所需要的血清蛋白。试分析回答下列问题：?

（1）临床上病人血清蛋白　　，往往造成组织水肿，其主要原因是　　　　　　　。?

（2）基因工程中所需的人类血清蛋白基因一般是用　　　方法得到的。?

（3）重组DNA的产生过程，一般先后要用到以下两种工具酶：　　　　　。?

（4）人的血清蛋白基因能在奶牛体内表达成功，说明人体与奶牛细胞共用了一套相同的　　，这个事实也是　在分子生物学上的一个证据。

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科目：高中生物 来源：2006年上海卷单科生物高考（答案） 题型：简答题

本题为分叉题。A适用于《生命科学》教材，B适用于《生物》教材。A和B中任选一题，两题都做以A给分。

A．农业科技工作者在烟草中找到了一抗病基因，现拟采用基因工程技术将该基因转入棉花，培育抗病棉花品系。请回答下列问题。

(1)要获得该抗病基因，可采用 ▲ 、 ▲ 等方法。为了能把该抗病基因转入到棉花细胞中，常用的载体是 ▲ 。

(2)要使载体与该抗病基因连接，首先应使用 ▲ 进行切割。假如载体被切割后，得到的分子末端序列为，则能与该载体连接的抗病基因分子末端是……………………………………………………( )