Question

11．艾滋病病毒（HIV）外壳的包膜上有多种蛋白质，其中包膜糖蛋白（env）基因编码gpl60蛋白，进一步加工成gpl20蛋白，具有较强的抗原性．制备抗HIV gpl20的单克隆抗体，为艾滋病的治疗带来希望．请回答下列问题：
（1）若利用动物细胞工程制备抗HIV gpl20的单克隆抗体，涉及到的技术手段主要有动物细胞培养技术、动物细胞融合技术．
（2）细胞融合常用的生物诱导剂是灭活的病毒．融合后需要用特定的选择性培养基筛选，只有融合的杂种细胞才能生长，这种细胞的特点是既能大量繁殖，又能产生抗HIVgpl20抗体．
（3）若要大量制备该单克隆抗体，可将筛选出来的细胞进行体外培养，在培养液中通入一定浓度的CO₂，主要作用是维持培养液的pH．
（4）科研人员设想用基因工程制备能表达抗HIV pl20抗体的重组细胞，获得目的基因可利用PCR技术扩增，需要在反应体系中添加的有机物有引物和模板DNA、Taq酶和4种脱氧核苷酸．利用显微注射法将目的基因导入骨髓瘤细胞．基因工程的核心是基因表达载体的构建．

Answer 1

分析 1、单克隆抗体的制备过程中利用了动物细胞融合技术和动物细胞培养技术，在制备的过程中的两次筛选考生必须识记，同时在进行杂交瘤细胞体外培养的过程需注意培养条件．
2、有关PCR技术的相关知识：
（1）概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术．
（2）原理：DNA复制．
（3）前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物．
（4）过程：①高温变性：DNA解旋过程；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链．PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开．

解答 解：（1）单克隆抗体的制备过程中，首先利用了动物细胞融合技术获得杂交细胞，然后利用动物细胞培养技术筛选出能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞．
（2）细胞融合常用的生物诱导剂是灭活的病毒．融合后需要用特定的选择性培养基筛选，只有融合的杂交瘤细胞才能生长，该细胞的特点是既能大量繁殖，又能产生抗HIV gpl20抗体．
（3）若要大量制备该单克隆抗体，可将筛选出来的细胞进行体外培养，在培养液中通入一定浓度的CO₂，来维持培养液的pH．
（4）PCR技术扩增目的基因的过程中，需要在反应体系中添加两种引物和模板DNA、Taq酶和4种脱氧核苷酸．利用显微注射法将目的基因导入骨髓瘤细胞．基因工程的核心是基因表达载体的构建．
故答案为：
（1）动物细胞培养技术、动物细胞融合技术
（2）灭活的病毒       杂种细胞    既能大量繁殖，又能产生抗HIV gpl20抗体
（3）维持培养液的pH
（4）引物和模板DNA     显微注射    基因表达载体的构建

点评 本题考查了单克隆抗体的制备以及基因工程的有关知识，要求考生能够识记单克隆抗体的制备过程以及应用的相关技术，掌握PCR技术的原理和条件，识记基因工程的操作步骤等，再结合所学知识准确答题．