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    3．如图表示构建均由35S启动子驱动的CMO基因与BADH基因的植物双基因表达载体，图中标注了相关限制酶的酶切位点，35S表示启动子及其方向．Nos表示终止子，hpt表示潮霉素抗性基因．请据图分析回答：

    （1）从功能上分析，35S是RNA聚合酶识别和结合的部位，Nos的功能主要是终止转录．
    （2）过程①应利用SacⅠ、SmaⅠ两种限制酶切割，酶切后回收载体A的大片段和CMO基因片段，加入含有DNA连接酶的缓冲液，获得载体C．进而在过程②中，利用HindⅢ、BstEⅡ两种限制酶切割载体C和载体D，获得载体E．
    （3）利用冻融法将载体E导入农杆菌中，制备成菌液LB．将无菌烟草叶片切成0.4cm2大小，加入到菌液LB中浸泡10min，以便充分导入目的基因．用无菌滤纸吸干叶片表面菌液，注入MS培养基，暗培养3d后转入到含有潮霉素的培养基中，筛选培养出含载体E的烟草若干株．
    （4）利用DNA分子杂交技术检测发现呈阳性的烟草植株，再进一步利用抗原-抗体杂交方法检测到CMO基因与BADH基因均有表达的烟草植株．

    分析 基因工程的四个步骤：
    ①目的基因的获取：常用的方法有从基因文库中获取、逆转录法、PCR技术扩增、化学合成法等．
    ②基因表达载体的构建：常用同种限制酶切割运载体和目的基因之后，用DNA连接酶连接．一般包括目的基因、标记基因、启动子和终止子．
    ③将目的基因导入受体细胞：植物细胞常用的有农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法；动物常用显微注射法；微生物常用钙离子处理法．
    ④目的基因的检测与表达：分子水平的检测有DNA分子杂交技术检测目的基因存在、分子杂交技术检测是否转录、抗原抗体杂交技术检测基因是否表达，还有个体水平的检测等．

    解答 解：（1）分析题干信息可知，从功能上分析，35S是启动子，启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位；Nos表示终止子，因此Nos的功能主要是终止转录．
    （2）分析图解可知，过程①应利用SacⅠ、SmaⅠ两种限制酶切割目的基因和载体A，酶切后回收载体A的大片段和CMO基因片段，加入含有DNA连接酶的缓冲液，获得载体C．在过程②中，要用相同的限制酶切割目的基因和载体C，因此需要利用HindⅢ、BstEⅡ两种限制酶切割载体C和载体D，获得载体E．
    （3）利用冻融法将载体E导入农杆菌中，制备成菌液LB．将无菌烟草叶片切成0.4cm2大小，加入到菌液LB中浸泡10min，以便充分导入目的基因．根据题意可知，“hpt表示潮霉素抗性基因”，该基因作为运载体上的标记基因，因此培养基中应该加入潮霉素．
    （4）利用DNA分子杂交技术检测发现呈阳性的烟草植株，再进一步利用抗原-抗体杂交方法检测到CMO基因与BADH基因均有表达的烟草植株．
    故答案为：
    （1）RNA聚合酶     终止转录
    （2）SacⅠ、SmaⅠDNA连接     HindⅢ、BstEⅡ
    （3）充分导入目的基因     潮霉素
    （4）CMO基因与BADH基因

    点评 本题主要考查与基因工程相关的知识，要求考生能够识记基因工程的操作程序，识记基因表达载体的组成；能够根据题干和题图信息确定启动子和终止子以及标记基因，并选择合适的限制酶切割质粒和目的基因，再根据所学知识进行相关判断．

    练习册系列答案
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