Question

7．1中含有链霉素，其它培养基中不含链霉素．请据实验回答：

（1）将原始对链霉素敏感大肠杆菌K12菌种涂布在培养皿1的表面培养，接着通过右图“印章”将培养皿1中的菌群“印”在培养皿2、3上培养．“印章”位置保持不变．培养皿2、3根据其功能，分别称为通用培养基、选择培养基．
（2）培养基3的A点处有菌落生长，将培养基2中相应的A点位置的菌落上挑出少量移入培养基4中．如图反复几次实验．请根据实验现象解释“微生物的突变是自发的还是环境因素导致的”：自发突变的．
（3）要分离出单个菌落，除了本实验中的涂布法外，还可以用划线法．
（4）上述不含链霉素培养基通常使用的是牛肉膏蛋白胨培养基，下表是另一种培养基配方，该培养基具有选择作用．

成分	KH2PO4	Na2PO4	MgSO4•7H2O	葡萄糖		尿素	琼脂
含量	1.4g	2.1g	0.2g		0.0g	1.0g	15.0g

（5）现有5种营养缺陷型菌株1、2、3、4、5，它们不能合成生长所必需的物质G，已知A、B、C、D、E都是合成G物质的必需中间产物，但不知这些物质合成的顺序，于是在培养基中分别加入这几种物质并分析了这几种物质对各种营养缺陷型菌株生长的影响，结果如下表所示．根据以上结果，推测这几种物质的合成顺序应是E→A→C→B→D→G．

物质 突变体	培养基中加入的物质
	A	B	C	D	E	F
1	-	-	-	+	-	+
2	-	+	-	+	-	+
3	-	-	-	-	-	+
4	-	+	+	+	-	+
5	+	+	+	+	-	+

Answer 1

分析 影印法接种的具体过程是：将待测的浓缩菌悬液涂在合适的平板上，等其长好后作为母平板（每平板上的菌落控制在50～300个）；用一小块灭菌的丝绒固定在直径较平板略小的圆柱形木块上，构成印章（即接种工具）；然后把长有菌落的母平板倒置在丝绒的印章上，轻轻印一下；再把此印章在另一含有选择培养基的平板上轻轻印一下，经培养后，选择培养基平板上长出的菌落与母平板上的菌落位置对应，比较影印平板与母平板上菌落生长情况，即可从相应位置的母平板上选出待测的突变型菌落．影印法最初是为证明微生物的抗药性突变是自发的、与相应的环境因素无关而设计的实验，目前已广泛应用于营养缺陷型的筛选以及抗药性菌株筛选等研究工作中．

解答 解：（1）培养基2，不论是对链霉素敏感的大肠杆菌K12还是抗链霉素大肠杆菌K12都能在上面生长，所以是通用培养基；培养基3加入了链霉素，只有抗链霉素大肠杆菌K12才能在上面生长，所以是选择培养基；印章在使用前必须进行灭菌处理，以消除印章上的杂菌对实验结果的影响．
（2）通过题图及问题描述分析可知，抗链霉素菌种的获得是从没有接触过链霉素的敏感细菌中获得的，所以抗链霉素菌种的突变是自发突变，不是环境因素引起．
（3）由题图看出，接种时用的是稀释涂布平板法，除此以外分离菌种常用的方法还有平板划线法．
（4）题图中不含链霉素的培养基通常使用的是牛肉膏蛋白胨培养基，分析表格中的培养基配方可知，在该配方中，尿素作为唯一氮源，只有能分解尿素的菌才能在上面生长，所以是选择培养基．
（5）有表格可知，加入G，5种突变体都能在上面生长，加入D，4种突变体能在上面生长，加入B，3种突变体能在上面生长，加入C，2种突变体能在上面生长，加入A，1种突变体能在上面生长，加入E，5种突变体都不能在上面生长．所以这几种物质的合成顺序应是E→A→C→B→D→G．
故答案应为：
（1）通用    选择
（2）自发突变的
（3）划线
（4）牛肉膏蛋白胨培养基     选择
（5）E→A→C→B→D→G

点评 本题主要考查微生物的影印法培养，意在考查选择培养的过程，提高学生的实验过程分析能力和相关实验技能．