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    【题目】乳腺炎和口蹄疫分别是由细菌和病毒引起的危害奶牛养殖业的两种严重疾病。研究者利用生物技术培育出转乳铁蛋白肽(抗细菌）和人干扰素(抗病毒）的双转基因奶牛新品种。下图1为基因表达载体，图2为培育流程。

    （1）培育双转基因奶牛涉及的生物技术有___________(至少2项）。

    （2）牛乳铁蛋白肽基因能在转基因奶牛的乳腺细胞表达，人干扰素基因则可在全身细胞表达，这与构建表达载体时_____________的选择有关。据图可知，干扰素基因与___________基因可同时转录，但在翻译时，核糖体可识别mRNA上IRES序列的对应部分，启动另一种肽链的合成，因此用含有新霉素的培养基可筛选出__________。

    （3）将基因导入牛胎儿成纤维细胞前，需用______________将其处理成单个细胞。成纤维细胞无法直接发育成个体，需要去核卵母细胞的细胞质诱导，以实现细胞核的_______________。

    （4）研究者利用___________技术筛选出___________(填“牛乳铁蛋白基因”或“干扰素基因”)成功表达的胚胎进行移植。

    【答案】基因工程、早期胚胎培养、核移植、胚胎移植 启动子 新霉素抗性 干扰素基因成功表达的细胞 胰蛋白酶 全能性 抗原一抗体杂交 干扰素基因

    【解析】

    本题考查基因工程、细胞工程、胚胎工程，考查对基因工程、细胞工程、胚胎工程操作步骤的理解和识记。据图2可知，培育双转基因奶牛涉及的生物技术包括转基因技术、核移植技术、早期胚胎培养技术和胚胎移植技术。

    （1）培育双转基因奶牛需要通过转基因技术将目的基因转入受体细胞，据图可知，除转基因技术外，获得双转基因奶牛还借助于核移植技术、早期胚胎培养和胚胎移植技术。

    （2）构建表达载体时启动子的位置可决定目的基因在何种细胞中表达。据图可知，干扰素基因与新霉素抗性基因均位于相同的启动子和终止子之间，可同时转录，在翻译时，核糖体可识别mRNA上IRES序列的对应部分，启动另一种肽链的合成，使新霉素抗性基因得到表达，因此在含有新霉素的培养基可生存的细胞干扰素基因也已成功表达。

    （3）对牛胎儿成纤维细胞用胰蛋白酶处理，可水解细胞间的胶原纤维，使细胞分散。将成纤维细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，卵母细胞的细胞质可诱导已分化的细胞核恢复分裂、分化，并最终发育为新个体，实现动物细胞细胞核的全能性。

    （4）牛乳铁蛋白基因在成年牛的乳腺中才能表达，人干扰素基因可在牛全身细胞表达，因此筛选胚胎时可利用抗原一抗体杂交技术筛选干扰素基因成功表达的胚胎。

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