Question

【题目】为获得果胶酶高产菌株，科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定工作。

（1）为分离果胶酶产生菌，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表空白处的两种成分是 。制备的培养基常用 法进行灭菌。

K2HPO4	MgSO4	NaNO3	FeSO4	琼脂
0．1g	0．5g	3g	0．01g	2g	15g	加至1L

（2）科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中，震荡混匀，制成悬液。为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行 ,用 法接种于固体培养基上。接种后的培养基 状态放人培养箱。

（3）选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落和 直径的比值，筛选果胶酶高产菌株。

（4）将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的 （填“上清液”或“沉淀物”）获得粗提的果胶酶。将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性。进行吸光值测定时，需将 与等量果胶溶液混合，作为实验的对照。

Answer 1

【答案】（1）果胶和蒸馏水 高压蒸汽灭菌

（2）梯度稀释（或系列稀释） （稀释）涂布平板 倒置

（3）水解（或透明）

（4）上清液 等量失活的粗提果胶酶

【解析】

试题分析：（1）依题意可知：该实验的目的是分离果胶酶产生菌，因此培养基中需要加入果胶，在配制过程中需用蒸馏水定容，所以该表空白处的两种成分是果胶和蒸馏水。制备的培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。

（2）为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行梯度稀释，并用稀释涂布平板法接种于固体培养基上。接种后的培养基倒置状态放入培养箱，以防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染。

（3）已知果胶与刚果红结合后显红色。果胶酶产生菌分泌的果胶酶能够将培养基中的果胶水解，当单菌落数目适宜的培养基中加入一定浓度的刚果红溶液一段时间后，洗去培养基表面的刚果红溶液，因菌落周围的果胶被分解，无法形成红色的复合物而出现水解透明圈，所以观察并比较菌落和水解（或透明）直径的比值，可筛选出果胶酶高产菌株。

（4） 将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的上清液获得粗提的果胶酶。将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性。进行吸光值测定时，需将等量失活的粗提果胶酶与等量果胶溶液混合，作为实验的对照。