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    【题目】下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。下列说法错误的是 （ ）

    A. 一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割后，含有4个游离的磷酸基团

    B. 用图1中的质粒和图2中的目的基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割

    C. 图2中为防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状，不能使用EcoRⅠ

    D. 为了获取重组质粒，最好用BamHⅠ和HindⅢ同时切割质粒和外源DNA

    【答案】A

    【解析】

    试题A、质粒切割前是双链环状DNA分子，所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键，故不含游离的磷酸基团．从图1可以看出，质粒上只含有一个SmaⅠ的切点，因此被该酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团，A错误；

    B、基因表达载体必须具备目的基因、启动子、终止子、标记基因，图中质粒的标记基因为抗生素抗性基因，而Sma I的切割位点就在该基因上，因此用质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma I切割，B正确；

    C、由于同种限制酶切割形成的黏性末端相同，图2中为防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状，不能使用EcoRⅠ，C正确；

    D、使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA，各自会有不同黏性末端，能防止自身环化，D正确．

    故选：A．

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    （1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有______________（答出两点即可）。

    而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。

    （2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是______________；并且______________和______________的细胞也是不能区分的，其原因是_____________。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有_____________的固体培养基。

    （3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于_____________

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    A. 内环境中的成分可以包括a、b、c、d、e

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