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    下表中列出几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题。

    （1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有　　　　个游离的磷酸基团。

    （2）若对图中质粒进行改造，插入SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越　　　。用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ，原因是　　　　　　　　　　。

    （3）与使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止　　　　　　　。

    （4）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入　　　酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了　　　　　　　。

    （5）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在　　　　　　　　　的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

     

    【答案】

    （7分）

    （1）0，2　（2）高　SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因，外源DNA中的目的基因　

    （3）质粒和合目的基因的外源DNA片段自身环化

    （4）DNA连接　鉴定和筛选合目的基因的细胞　

    （5）蔗糖为唯一含碳营养物质

    【解析】本题考查基因工程的相关知识。限制性内切酶具有特异性，能识别特定的碱基序列并在特定的位点切割DNA分子。:(1)切割前质粒为环状,不含游离的磷酸基团。切割后质粒成了一个链状的双链DNA分子,含两个游离的磷酸基团。

    (2)因为SmaⅠ识别序列中均为G—C碱基对,G、C之间含三个氢键,热稳定性高。

    (3)据图可知,SmaⅠ既会破坏标记基因,也会破坏目的基因。

    (4)若用同种限制酶切割质粒和外源DNA中的目的基因,因为两端的黏性末端相同,会出现自身环化的情况。而用两种限制酶切割,因为两端形成的黏性末端不同,不会出现自身环化。

    (5)DNA连接酶可以连接具有相同黏性末端的DNA片段。

    (6)标记基因可以鉴别受体细胞是否含有目的基因。目的基因是蔗糖转运蛋白基因，将其导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体后，应进行目的基因的检测与鉴定，可根据受体细胞是否含有蔗糖转运蛋白，即是否具备吸收蔗糖的能力判断基因工程是否成功。因而可在含有蔗糖唯一碳源的培养基中培养。

     

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    下表中列出几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题。

    （1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有　　　　个游离的磷酸基团。
    （2）若对图中质粒进行改造，插入SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越　　　。用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ，原因是　　　　　　　　　　。
    （3）与使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止　　　　　　　。
    （4）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入　　　酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了　　　　　　　。
    （5）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在　　　　　　　　　的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

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    科目：高中生物 来源：2010-2011学年河南省许昌市四校高二下学期第一次联考生物试卷 题型：综合题

    下表中列出几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，请回答下列问题

    限制酶
    		BamHⅠ
    		Hind Ⅲ
    		EcoRⅠ
    		SmaⅠ
    识别序列及
    切割位点
    		G↓GATC C
    C CTAG↑G
    		A↓AGCT T
    T TCGA↑A
    		G↓AATT C
    C TTAA↑G
    		CCC↓GGG
    GGG↑CCC
    (1)一个图Ⅰ所示的质粒分子经SmaⅠ切割后，含有        个游离的磷酸基因
    (2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越               
    (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是                                          .
    (4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BmaHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止             。
    (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入               酶
    (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了               。
    (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在         的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测

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    科目：高中生物 来源：2013-2014学年甘肃兰州一中高三上期期末考试生物卷（解析版） 题型：综合题

    （15分）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

    (1)一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有____ 、____个游离的磷酸基团。

    (2)若对图中质粒进行改造，插入的Sma Ⅰ酶切位点越多，质粒的热稳定性越______。

    (3)要用图1中的质粒和图2中外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割,原因是                                                          。

    (4)与只使用EcoR Ⅰ相比较，使BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止___________________________             __。

    (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。

    (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_________________________________。

    (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在____________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

     

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    科目：高中生物 来源：2012届河南省许昌市四校高二下学期第一次联考生物试卷 题型：综合题

    下表中列出几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，请回答下列问题

    限制酶

    BamHⅠ

    Hind Ⅲ

    EcoRⅠ

    SmaⅠ

    识别序列及

    切割位点

    G↓GATC C

    C CTAG↑G

    A↓AGCT T

    T TCGA↑A

    G↓AATT C

    C TTAA↑G

    CCC↓GGG

    GGG↑CCC

    (1)一个图Ⅰ所示的质粒分子经SmaⅠ切割后，含有         个游离的磷酸基因

    (2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越               

    (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是                                           .

    (4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BmaHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止              。

    (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入                酶

    (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了                。

    (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在          的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测

     

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