Question

【题目】如图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图．图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度．请据图回答：

（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是____________________，__________________。

（2）将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到_____________________________酶．如果是两两重组，可能有_________________种长度的重组结果。

（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤。现运用_____________酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb和____________kb，或者___________kb和__________kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）。

（4）基因治疗包括___________________和_________________。

Answer 1

【答案】 缺少标记基因 复制原点被限制酶切割 限制酶（PvuⅠ）和DNA连接酶 3 EcoRⅠ 5.6 3.1 3.6 体外基因治疗 体内基因治疗

【解析】试题分析：本题考查基因工程，考查对质粒特点、限制酶使用、基因表达载体构建方法的理解。解答此题，可根据目的基因两端限制酶的识别、切割位点选择合适的限制酶和质粒，根据目的基因插入质粒时两种不同的方向和PvuⅠ和EcoRⅠ识别、切割位点判断用EcoRⅠ酶切重组质粒后形成的片段大小。

（1）据图可知，目的基因两端含有PvuⅠ的识别、切割位点，切割目的基因需使用PvuⅠ，质粒A中不含有标记基因，质粒 C中复制原点含有PvuⅠ的识别、切割位点，因此均不能作为目的基因运载体。

（2）将目的基因与质粒B进行重组，需要用同种限制酶切割，以产生相同的黏性末端，应使用PvuⅠ切割目的基因和质粒，然后用DNA连接酶进行连接。如果是两两重组，可得到目的基因与目的基因连接、目的基因与质粒B连接、质粒B与质粒B连接三种连接产物，据图可知，目的基因长度为4.0kb，质粒B大小为2.7kb，则可能有8.0kb、5.4kb、6.7kb三种长度的重组结果。

（3）据图可知，目的基因和质粒B中均含有EcoRⅠ识别、切割位点，若质粒与目的基因重组成功，则重组质粒大小为6.7kb，含有两个EcoRⅠ识别、切割位点，质粒B中PvuⅠ和EcoRⅠ识别、切割位点之间有0.1kb大小的片段，根据目的基因中EcoRⅠ识别、切割位点的位置，用EcoRⅠ酶切重组质粒，应产生两种大小的片段，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb的片段，则还应有5.6kb的一种片段。考虑目的基因插入的方向不同，还可能有3.1kb和3.6kb两种大小的片段。

（4）根据向人体细胞转移目的基因发生在体内还是体外，基因治疗分为体外基因治疗和体内基因治疗。