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1975年英国科学家Milestein和Kohler开创了将产生抗体的单个细胞同瘤细胞融合的技术,解决了在体外培养并获得大量纯一的单克隆抗体的难题.如图一所示.阅读下列资料,并回答有关问题:
资料一:B淋巴细胞在体外培养条件下,不能无限大量增殖,故在培养条件下不能存活.瘤细胞在体外培养条件下可以无限传代,是“永生”的细胞.
资料二:细胞合成DNA有“主要合成途径”和“应急途径”(如图二所示).当“主要合成途径”被阻断时,具有次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)的细胞在主要合成途径被阻断时,可通过应急途径合成DNA,即细胞可利用次黄嘌呤合成嘌呤核苷酸,利用胸腺嘧啶核苷合成嘧啶核苷酸,从而继续合成DNA.骨髓瘤细胞具有正常型和具有次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶缺陷型(HGPRT-)和胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型(TK-),即该细胞不具有HGPRT和TK.
资料三:HAT培养基由次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶核苷三种成分组成,简称HAT.氨基喋呤有阻断DNA主要合成途径的作用.

(1)获取小鼠脾细胞(B淋巴细胞)前,需向小鼠腹腔内注射
 
.旋转培养的小鼠骨髓瘤细胞选用
 
(正常型/缺陷型).将脾细胞悬液与瘤细胞混合,离心去掉上清液.迅速向细胞沉淀物中加入
 
促融,静置1分钟,加稀释液终止其促融作用.
(2)①中加入
 
.其作用是
 
.其中,脾细胞不能存活,因为
 
;骨髓瘤细胞也不能存活,因为
 
;只有杂交瘤细胞能存活,因为
 

(3)过程②需检测
 
,筛选出X重复克隆.Y是
 

(4)杂交瘤细胞也可将T淋巴性的淋巴瘤或胸腺瘤同T淋巴细胞融合,产生T淋巴细胞杂交瘤,分泌均一的
 
考点:单克隆抗体的制备过程
专题:
分析:1.制备单克隆抗体的诱导过程有:正常小鼠免疫处理、动物细胞的融合(物、化、生法)、杂交瘤细胞的筛选与培养、专一抗体检验阳性细胞培养、单克隆抗体的提纯.
2.单克隆抗体:由单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞系所产生出的化学性质单一、特异性强的抗体.
3.三次筛选:①筛选能够产生单一抗体的B淋巴细胞②筛选得到杂交瘤细胞(去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞)③筛选出能够产生特异性抗体的细胞群.
4.杂交瘤细胞的特点:既能大量增殖,又能产生特异性抗体.
5.分析题图:制备单克隆抗体的方法是用缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷酸酶的瘤细胞变异株与脾脏的B细胞融合.采用HAT选择性培养基(培养基中加次黄嘌呤、氨基喋呤、及胸腺嘧啶核苷),在这种选择性培养基中,由于变异的瘤细胞不具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷激酶,所以不能利用培养基中的次黄嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA.而只能利用糖与氨基酸合成DNA,这一途径又被氨基喋呤所阻断,所以未融合的瘤细胞不可避免也要死亡.融合的杂交瘤细胞由于脾淋巴细胞具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶,可以通过次黄嘌呤合成DNA,克服氨基喋呤的阻断,因此杂交瘤细胞大量繁殖而被筛选出来.
解答: 解:(1)要制备单克隆抗体,正常小鼠免疫处理,需向小鼠腹腔内注射抗原,培养的小鼠骨髓瘤细胞选用缺陷型,将脾细胞悬液与瘤细胞混合,离心去掉上清液.迅速向细胞沉淀物中加入灭活的病毒促融,静置1分钟,加稀释液终止其促融作用.
(2)①培养基中加入次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶核苷,其作用是阻断DNA主要合成途径,保留合成DNA的应急途径.其中,脾细胞不能存活,因为脾细胞在体外培养条件下,不能无限大量增殖,故在培养条件下不能存活,骨髓瘤细胞也不能存活,因为融合的杂交瘤细胞由于脾淋巴细胞具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶,可以通过次黄嘌呤合成DNA,克服氨基喋呤的阻断,因此杂交瘤细胞大量繁殖而被筛选出来.
(3)过程②需检测特异性抗体,筛选出X重复克隆.Y是单克隆抗体.
(4)杂交瘤细胞也可将T淋巴性的淋巴瘤或胸腺瘤同T淋巴细胞融合,产生T淋巴细胞杂交瘤,分泌均一的淋巴因子.
故答案为:
(1)抗原   缺陷型     灭活的病毒
(2)次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶核苷    阻断DNA主要合成途径,保留合成DNA的应急途径
脾细胞在体外培养条件下,不能无限大量增殖,故在培养条件下不能存活
由于变异的瘤细胞不具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷激酶,所以不能利用培养基中的次黄嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA.而只能利用糖与氨基酸合成DNA,这一途径又被氨基喋呤所阻断,所以未融合的瘤细胞不可避免也要死亡.
融合的杂交瘤细胞由于脾淋巴细胞具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶,可以通过次黄嘌呤合成DNA,克服氨基喋呤的阻断,因此杂交瘤细胞大量繁殖而被筛选出来.
(3)特异性抗体   单克隆抗体
(4)淋巴因子
点评:本题考查了制备单克隆抗体及动物细胞培养的相关内容,要求学生熟记具体流程、原理、筛选目的、单克隆抗体的特点和应用.
练习册系列答案
相关习题

科目:高中生物 来源: 题型:

下列有关组成生物体化学元素的叙述,正确的是(  )
A、组成生物体的化学元素在无机自然界都可以找到
B、细胞中的微量元素因含量极少而不如大量元素重要
C、碳元素是最基本的元素,原因是其在细胞干重中含量总是最多
D、核酸中的N存在于碱基中,蛋白质中的N主要存在于氨基酸的R基中

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科目:高中生物 来源: 题型:

下列关于基因、DNA、遗传信息和染色体的描述,错误的是(  )
A、基因在染色体上呈线性排列
B、染色体是基因的主要载体
C、遗传信息是指基因的脱氧核甘酸的排列顺序
D、每条染色体只含有1个DNA分子

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科目:高中生物 来源: 题型:

如图是哺乳动物体内的一个细胞分裂图象,则该细胞不可能表示(  )
A、初级精母细胞
B、次级精母细胞
C、第一极体
D、处于减数第二次分裂

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科目:高中生物 来源: 题型:

如图是某雄性动物生殖细胞形成过程中的部分时期细胞示意图,请回答问题:
(1)图中属于次级精母细胞的是
 

(2)④中有
 
条染色体,此时期每条染色体中有
 
个DNA分子.
(3)图中含有同源染色体的细胞是
 
.图中不含染色单体的是
 

(4)按生殖细胞的形成过程,①~④的正确排序应为
 

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科目:高中生物 来源: 题型:

根据传统发酵技术,人们在家里也可以自制糯米酒.利用所学知识,回答下节有关问题:糯米酒酿造过程中的微生物主要是酵母菌,其代谢类型是
 
与细菌相比其细胞结构特点是
 

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科目:高中生物 来源: 题型:

小蚌兰叶片正面呈绿色,背面呈紫红色,常用作盆栽观赏.某兴趣小组为探究细胞液浓度大小进行了如下实验:
①配制不同浓度的蔗糖溶液;
②制作小蚌兰叶片下表皮临时装片;
③用显微镜观察小蚌兰叶片下表皮细胞质壁分离程度;
④将小蚌兰叶片下表皮临时装片中的清水换成不同浓度的蔗糖溶液;
⑤观察并记录实验结果.结果如表(“-”表示不能发生,“+”表示能发生,“+”越多表示程度越大),分析回答:
蔗糖浓度/g?mL-10.200.250.300.350.400.450.500.55
质壁分离程度----+++++++++
(1)选用小蚌兰下表皮作实验材料的优点是
 
,植物细胞原生质层的选择透过性取决于
 
(结构).
(2)实验步骤④的正确操作方法是
 

(3)换用高倍物镜观察时,应转动
 
进行调焦.
(4)小蚌兰叶片下表皮细胞液浓度与在
 
之间的蔗糖溶液浓度相当.
(5)通过实验发现,细胞质壁分离程度越大,气孔张开程度越小甚至关闭.请据此拟定一个相关的研究课题:
 

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科目:高中生物 来源: 题型:

下列有关细胞的组成物质及结构的叙述中,不正确的是(  )
A、蛋白质、糖类都是由相应单体连接成的多聚体
B、细胞膜、核膜、原生质层都具有选择透过性
C、线粒体内膜和基质中都有与有氧呼吸相关的酶
D、有中心体的细胞也可能会发生质壁分离现象

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科目:高中生物 来源: 题型:

人体免疫与健康
图是人体免疫反应过程的模式图,图中数字表示生理过程,字母表示物质成分或结构.

(1)写出图中有关编号的名称:
细胞E
 
    细胞G
 
     己
 

(2)表示免疫分子的有
 

(3)表示非特异性免疫反应的生理过程编号有
 

(4)细胞G可以通过过程⑦、⑧发挥免疫作用,还可以
 

(5)关于上图?的有关叙述正确的有
 
(多选)
A.病毒体可直接诱导特异性免疫反应         B.一种病原体可能不止一种抗原
C.细胞F不能独立识别抗原                 D.不同免疫机制相互独立
E.能直接使病毒失去感染能力的是戊
(6)若是乙肝病毒侵染人体,则人体血液中会发现四种抗体,其可能的原因是
 

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同步练习册答案