Question

5．为获得果胶酶高产菌株，科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定工作．
（1）为分离果胶酶产生菌，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表空白处的两种成分是果胶和蒸馏水．制备的培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌．

K2HPO4	MgSO4	NaNO3	FeSO4		琼脂
0.1g	0.5g	3g	0.01g	2g	15g	加至1L

（2）科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中，震荡混匀，制成悬液．为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行梯度稀释，用稀释涂布法接种于固体培养基上．接种后的培养基倒置状态放人培养箱．
（3）选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落水解（或“透明”）直径的比值，筛选果胶酶高产菌株．
（4）将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的上清液（填“上清液”或“沉淀物”）获得粗提的果胶酶．将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性．进行吸光值测定时，需将等量失活的粗提果胶酶与等量果胶溶液混合，作为实验的对照．

Answer 1

分析 微生物的分离是研究和利用微生物的第一步，也是微生物工作的基本方法和重要环节．土壤中的微生物很多，本题中要从土壤中获得果胶酶高产菌株．接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法．

解答 解：（1）由于实验目的是分离果胶酶产生菌，所以培养基中需要加入果胶，在配制过程中，需要用蒸馏水先配制成液体培养基，再凝固成固体培养基．制备的培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌．
（2）为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行梯度稀释，并用稀释涂布法接种于固体培养基上．接种后的培养基倒置状态放入培养箱，防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染．
（3）选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落和水解直径的比值，筛选果胶酶高产菌株．
（4）将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的上清液获得粗提的果胶酶．将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性．进行吸光值测定时，需将等量失活的粗提果胶酶与等量果胶溶液混合，作为实验的对照．
故答案为：
（1）果胶和蒸馏水    高压蒸汽灭菌
（2）梯度稀释    稀释涂布    倒置
（3）水解（或“透明”）
（4）上清液    等量失活的粗提果胶酶

点评 本题考查分离和培养果胶酶高产菌株的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力．