Question

下面是某研究小组开展的“猪血浆某白蛋白的提取及分子量测定”研究，请协助完成有关问题：
材料仪器：新鲜猪血、低速冷冻离心机、透析袋、电泳仪等．
化学试剂：pH为7.4的缓冲液、柠檬酸钠、奈氏试剂（与NH₄⁺反应出现黄色或红棕色沉淀）、饱和（NH₄）₂SO₄溶液、生理盐水等．
实验步骤：
（1）样品获取：向新鲜猪血中加入

 

，静置一段时间后取上层

 

．
（2）盐析法粗提蛋白质：
①向血浆中加入一定体积的饱和（NH₄）₂SO₄溶液，使（NH₄）₂SO₄的浓度达到50%，充分混合后静置、离心，取沉淀物．
②向沉淀物中加入适量生理盐水使之溶解，再向其中加入一定体积的饱和（NH₄）₂SO₄溶液，使（NH₄）₂SO₄的浓度达到33%，充分混合后静置、离心，取沉淀物．
③重复步骤①、②2～3次，最后用生理盐水将沉淀溶解即得粗提品．
盐析粗提“血浆某白蛋白”的主要原理是

 

，重复步骤①、②的主要目的是

 

．
（3）透析除盐：将粗提品装入透析袋，以pH为7.4的缓冲液作透析液，每隔4h更换一次透析液，每次更换前利用奈氏试剂检测透析液中NH₄⁺的量．利用缓冲液作透析液的目的是

 

．检测中，若观察到透析液

 

时，即可终止透析．
（4）凝胶色谱法分离：透析后的样品经凝胶柱洗脱，获得纯净血浆某白蛋白样品．
（5）分子量测定：化学物质SDS能使蛋白质变性，解聚成单条肽链．在聚丙烯酰胺凝胶电泳中加入一定量的SDS，电泳迁移率完全取决于肽链的分子大小．如图为本实验中用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆某白蛋白的结果．根据电泳结果，某同学得出“提取的血浆某白蛋白有两条肽链”的结论，这种说法可靠吗？理由是

 

．

Answer 1

考点：蛋白质的提取和分离

专题：

分析：盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐，使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出，而与其他成分分离的方法．盐析法主要用于蛋白质的分离纯化，常作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等．

解答： 解：实验步骤：
（1）样品获取：向新鲜猪血中加入（适量的）柠檬酸钠以防止血液凝固，静置一段时间后取上层血浆．
（2）盐析法粗提蛋白质：
分析实验步骤可知，盐析粗提“血浆某白蛋白”的主要原理是该血浆白蛋白在50%和33%的（NH₄）₂SO₄溶液中溶解度低，重复步骤①、②的主要目的是除去更多的杂蛋白．
（3）利用缓冲液作透析液的目的是维持pH值的相对稳定，防止pH变化对蛋白质结构造成破坏．检测中，若观察到透析液不出现黄色或红棕色沉淀时，说明小分子血浆蛋白已去除干净，即可终止透析．
（5）不可靠，由图可知，只能得出提取的血浆某白蛋白含有两种大小不同的肽链，而不一定是只有两条．
故答案为：
（1）（适量的）柠檬酸钠     血浆
（2）该血浆白蛋白在50%和33%的（NH₄）₂SO₄溶液中溶解度低    除去更多的杂蛋白
（3）防止pH变化对蛋白质结构造成破坏   不出现黄色或红棕色沉淀
（5）不可靠，只能得出提取的血浆某白蛋白含有两种大小不同的肽链，不一定是两条

点评：本题考查蛋白质的提取及分子量的测定，对相关实验方法的掌握是解题的关键．