下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图。请据图回答：
⑴过程①和②必需用到的酶是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。绿色荧光蛋白基因在猪体内表达的步骤是＿＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿。
⑵重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有＿＿＿＿＿＿＿＿＿才能构成一个完整的基因表达载体。
⑶为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射＿＿＿＿＿＿＿＿＿的方法来达到目的。
⑷将所采集到的卵母细胞在体外通过显微操作将其＿＿＿＿＿＿＿＿＿去除并形成重组细胞，然后再通过＿＿＿＿＿＿＿技术培养成早期胚胎。
（5）早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机物外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及＿＿＿＿＿＿＿等物质。
应用题天天练四川大学出版社系列答案科目：高中生物 来源： 题型：
分析回答有关生物工程中的问题：
日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图．据图回答：
（1）绿色荧光蛋白基因在该实验中是做为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶I的识别序列和切点是—G’GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割所形成的黏性末端的过程：________________________
_________。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是_______________ ___。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_______________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是（用数字表示）：_______ ___ 。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。
(5)在培养重组细胞时，培养液中通常含有_____________、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。
(6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________等（至少答出三项）。
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科目：高中生物 来源：2010年安徽省合肥市第一中学高二下学期期中考试生物卷 题型：综合题
(7分)我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：
(1)过
程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有＿＿＿＿、＿＿＿＿、＿＿＿＿等才能构成一个完整的基因表达载体。
(2)将所采集到的卵母细胞在体外培养到＿＿＿＿＿＿＿＿期即可通过显微操作将其细胞核去除并形成重组细胞，然后再通过＿＿＿＿＿＿＿＿技术培养成早期胚胎。
(3)早期胚胎的培养液成分较复杂，人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，通常加入＿＿＿＿等一些天然成分。
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科目：高中生物 来源：2013届海南省高二下学期期中考试生物试卷（解析版） 题型：综合题
2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
注：图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
（1）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来 ，理由是： 。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是 。
（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是 。获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是，可以避免 。
（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是： （用数字表示）。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）
④表达出蓝色荧光蛋白。
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科目：高中生物 来源：2010-2011学年吉林省高三冲刺（一）（理综）生物部分 题型：综合题
2008年1月7日，东北农业大学培育出我国第二代绿色荧光蛋白转基因克隆猪。研究人员是先从一种特殊水母中提取绿色荧光蛋白基因，然后把该基因经过处理后转移到培养的猪胎儿成纤维细胞的基因组中，再把转基因体细胞的细胞核移植到成熟的去核猪卵母细胞中构建成转基因胚胎。再经过手术移植入受体母猪，经过发育最终获得绿色荧光蛋白转基因克隆猪。
下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图。请据图回答：
（1）过程①和②必需用到的酶是 。
（2）重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有 才能构成一个完整的基因表达载体。
（3）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射 的方法，做超数排卵处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到 期即可通过显微操作将其细胞核去除。
（4）早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素．激素．氨基酸．核苷酸等营养成分，以及 等物质。
（5）如果想同时得到多头绿色荧光蛋白转基因克隆猪，可通过胚胎分割技术得以实现。但应选择发育良好．形态正常的 期胚胎进行操作，且要注意 ，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
（6）与一般的繁育良种动物方式相比较，胎胎移植的优势是 。
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科目：高中生物 来源：2010年广东省汕头市高二下学期期中试题生物卷 题型：综合题
2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：
（1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。若限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是一G↓GATCC一，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC一。在质粒上有酶I的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
①请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。
②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来? ＿＿＿＿＿。理由是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（2）GFP基因与目的基因一起构建到载体上不影响目的基因的表达，也不影响由目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能,且对细胞无毒性作用，因此GFP基因可以运用作为基因表达载体上的＿＿＿＿＿＿。
（3）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。然后还要通过＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿技术来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上。
（4）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的方法，做超数排卵处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿期即可通过显微操作将其细胞核去除。
（5）早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿等物质。
（6）绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程属于＿＿＿＿＿＿生殖。目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：＿＿＿＿＿＿(用数字表示)。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
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