Question

【题目】将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是不植物疫苗制备过程相关的图和表。

表 1 引和对序列表

引物对 A	P1 AACTGAAATGTAGCTATC P2 TTAAGTCCATTACTCTAG
引物对 B	S1 GTCCGACTAGTGGCTGTG S2 AGCTGGCGTTTAGCCTCG

表 2 几种限制酶识别序列及切割位点表

限制酶	Alu I	EcoR I	Pst I	Sma I
切割位点	AG↓CT TC↑GA	G↓AATTC CTTAA↑G	CTGCA↓G G↑ACGTC	CCC↓GGG GGG↑CCC

请根据以上图表回答下列问题。

（1）在采用常见 PCR 方法扩增目的基因的过程中，需要解旋酶吗？_____使用的DNA 聚合酶不同于一般生物体内的 DNA 聚合酶，其最主要的特点是___________________。

（2）PCR 过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表 1 为根据 模板设计的两对引物序列，图 2 为引物对不模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较 高的退火温度？___________________ 。

（3）画出 X 处的末端组成 ______________________________ 。

（4）图 1 步骤③所用的 DNA 连接酶对所连接的 DNA 两端碱基序列是否有与一性要求？

_______________。

（5）为将外源基因转入马铃薯，图 1 步骤⑥转基因所用的细菌 B 通常为___________________。

（6）对符合设计要求的重组质粒 T 迕行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开， 请根据图 1 中标示的酶切位点和表 2 所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。

①采用 EcoR I 和 Pst I 酶切，得到___________________ 种 DNA 片断。

②采用 EcoR I 和 Sma I 酶切，得到___________________ 种 DNA 片断。

（7）抗原基因在马铃薯体内会表达出抗原，抗原进入动物体内会刺激其_____细胞 增殖分化成_____细胞和_____细胞，从而获得免疫能力。

。

Answer 1

【答案】不需要 耐高温 引物对 B 没有 农杆菌 2 1 B 浆 记忆

【解析】

PCR技术：
1、概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。

2、原理：DNA复制。

3、前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。

4、过程：①高温变性：DNA解旋过程；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链，PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开。

（1）PCR过程中是通过高温使氢键断裂的，因此不需要加入解旋酶，使用的DNA聚合酶具有耐高温的特性。

（2）耐高温的DNA分子中通常含有G与C碱基比例大，因为它们之间形成三个氢键，因此稳定性强。引物B中含C与G的碱基对较多，可采用较高的退火温度。

（3）通过图1看出X是经限制性酶EcoRI和AluI切割的末端，再通过表2可以得出，X 处的末端组成是：

（4）多种限制酶切割，形成不同的切割位点，所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列就没有专一性要求。

（5）植物基因工程中常用农杆菌做受体细胞。

（6）据图分析，用到了EcoR I酶和Alu I酶切割抗原DNA片段产生了X、Y两个片段，而用EcoR I酶和SmaI酶切割质粒产生了 M、N两个片段，且M、N片段间存在Pst I酶切点，因此再用EcoRⅠ和PstⅠ酶切割这两片段形成的重组质粒，由于保留了Pstl的切割位点，所以可以得到两种DNA分子。而用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重组质粒中，如图I-②过程只能产生一种DNA片断。

（7）抗原进入动物体内，刺激其B细胞，B细胞增殖分化成浆细胞和记忆B细胞，从而获得免疫能力。