Question

12．资料甲：某种细菌体内有抗虫基因，该基因能指导抗虫毒蛋白的合成．我国科学家成功地将该抗虫基因导入棉花细胞中，培育出了抗虫效果好的棉花新品种．
资料乙：研究表明，抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，科学家利用小鼠制备出了抗H蛋白的单克隆抗体．
请回答下列问题：
（1）资料甲中，获取抗虫基因时可使用EcoRI，其原因是含抗虫基因的DNA片段中含有EcoRI能够识别的特定的核苷酸序列．向棉花细胞导入抗虫基因时，我国科学家采用了花粉管通道法．抗虫基因导入棉花细胞后，为确定棉花植株是否具有抗虫特性以及抗性的程度如何，需要做抗虫的接种实验进行个体水平的鉴定．
（2）资料乙中，选择H蛋白作为单克隆抗体的作用靶点，是因为H蛋白在成年个体的正常组织细胞中低表达（填“低表达”或“高表达”）．将H蛋白注射到小鼠体内，从该小鼠的脾脏中获得相应的B淋巴细胞，将其与骨髓瘤细胞进行融合，细胞融合利用的原理是细胞膜具有流动性．与植物原生质体融合过程相比，该融合过程特有的诱导方法是用灭活的病毒处理．在杂交瘤细胞的体外培养过程中，培养液中是否需要添加血清需要（填“需要”或“不需要”）；培养箱中充入5% CO₂的主要作是维持培养液（适宜）的pH．为避免培养过程中代谢产物对杂交瘤细胞的毒害，常采取的措施是定期更换培养液（基）．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）EcoRI为一种限制酶，能够识别的特定的核苷酸序列（GAATTC）并在特定的位点上进行切割，而含抗虫基因的DNA片段中含有EcoRI的识别序列和切割位点，因此获取抗虫基因时可使用EcoRI．向棉花细胞导入抗虫基因时，我国科学家采用了花粉管通道法．为确定棉花植株是否具有抗虫特性以及抗性的程度如何，在个体水平上需进行抗虫的接种实验．
（2）由题意“抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长”可推知：H蛋白在成年个体的正常组织细胞中低表达．动物细胞进行融合的原理是细胞膜具有流动性，与植物原生质体融合过程相比，该融合过程特有的诱导方法是用灭活的病毒处理．由于人们对动物细胞所需要的营养物质没有完全搞清楚，因此在杂交瘤细胞（动物细胞）的体外培养过程中，培养液中需要添加血清、血浆等一些天然物质．培养箱中充入5% CO₂的主要作是维持培养液（适宜）的pH．为避免培养过程中代谢产物对杂交瘤细胞的毒害，常采取的措施是定期更换培养液．
故答案为：
（1）EcoRI能够识别的特定的核苷酸序列     花粉管通道    抗虫的接种
（2）低表达     细胞膜具有流动性      用灭活的病毒处理      需要    维持培养液（适宜）的pH
定期更换培养液（基）

点评 本题考查了基因工程及动物细胞融合在生产实践中的应用，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤等，掌握各步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确解答．