Question

9．用农杆菌转化法可以获取转基因抗病植物，回答有关问题：
（1）若该抗病基因取自某种真菌的CDNA文库，转入植物细胞后，（能、否）能正常表达．若想短时间内得到大量的抗病基因，需用到PCR技术，中文全称为多聚酶链式反应引物，条件除了原料、能量、模板外还需要Taq（或热稳定DNA聚合）．
（2）某培养基中的卡那霉素会抑制愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的植物细胞，应使构建的基因表达载体中含有抗卡那霉素基因，作为基因标记
（3）农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染裸子植物和双子叶植物，其原因是该类植物受到损伤时，伤口的细胞会分泌大量的酚类物质，吸引农杆菌移向这些细胞．
（4）Ti质粒的T-DNA（可转移的DNA）可整合到植物细胞中染色体DNA上，所以，构建基因表达载体时，将目的基因插入到T-DNA序列中．用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶．

Answer 1

分析 1、农杆菌转化法的具体过程：
（1）利用土壤的Ti质粒构建基因表达载体，即将目的基因整合到土壤农杆菌的Ti质粒上．
（2）将整合了目的基因的Ti质粒导入土壤农杆菌细胞内．
（3）利用土壤农杆菌感染植物细胞，该过程实际上是将含有目的基因的土壤农杆菌Ti质粒导入植物细胞内．
（4）含有目的基因的土壤农杆菌Ti质粒进入植物细胞后，可以把自己的一段基因整合到细胞核中的染色体上，这段基因中包含了目的基因．
2、农杆菌转化法的原理：农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上．

解答 解：（1）cDNA文库中的基因虽然没有启动子和终止子，但在构建基因表达载体时，已经具备了启动子和终止子等结构，因此转入植物细胞后，能正常表达．PCR技术可在短时间能得到大量的抗病基因；PCR技术的中文全称为多聚酶链式反应引物，条件除了原料、能量、模板外还需要Taq（或热稳定DNA聚合）．
（2）某培养基中的卡那霉素会抑制愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的植物细胞，应使构建的基因表达载体中含有抗卡那霉素基因，作为基因标记．
（3）农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染裸子植物和双子叶植物，其原因是该类植物受到损伤时，伤口的细胞会分泌大量的酚类物质，吸引农杆菌移向这些细胞．
（4）Ti质粒的T-DNA（可转移的DNA）可整合到植物细胞中染色体DNA上，所以，构建基因表达载体时，将目的基因插入到T-DNA序列中．构建基因表达载体时，首先需要用限制酶切割外源DNA和运载体，其次需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA分子．
故答案为：
（1）能   PCR   多聚酶链式反应引物   Taq（或热稳定DNA聚合）
（2）抗卡那霉素      标记
（3）土壤    裸子植物      双子叶       酚类物质
（4）染色体DNA   T-DNA序列        限制酶和DNA连接酶

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．