Question

7．尿素是一种高浓度氮肥长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后，才能被植物吸收利用．分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解．某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下：

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4•7H2O	蛋白胨	葡萄糖	尿素	琼脂
1.4g	2.1g	0.2g	l.0g	10.0g	l.0g	15.0g

（1）根锯培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌不能 （能/不能），原因是培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源．不能选择出只分解以尿素为氮源的微生物．
（2）要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用稀释涂布平板法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的菌落数目就能大约推测出样品中活菌数．
（3）牛肉膏蛋白胨培养基是微生物培养中常用的培养基，其中的蛋白胨为微生物的生长提供了碳源、氮源、维生素（特殊营养物质）  等营养物质，接种前要对培养基进行高压蒸汽灭菌法进行灭菌．在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行．
（4）一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓度过高，应当怎样操作才可避免此种现象？对菌液进行梯度稀释（加大稀释倍数）．

Answer 1

分析 1、尿素分解菌体内的脲酶能够将土壤中的尿素分解为氨才能被植物吸收利用，尿素分解菌属于细菌，筛选尿素分解菌需要使用以尿素为唯一碳源的选择培养基．
2、微生物筛选与培养的关键是无菌操作，常用的接种方法是稀释涂布平板法和平板划线法．

解答 解：（1）据题表分析，表中的配方不能筛选分离出尿素分解菌，原因是没有使用选择培养基，即培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只分解以尿素为氮源的微生物．
（2）稀释涂布平板法接种常用来进行微生物的计数，统计平板上的菌落数目可以推测出样品中活菌数．
（3）牛肉膏蛋白胨培养基是微生物培养中常用的培养基，其中的蛋白胨为微生物的生长提供了碳源、氮源、维生素（特殊营养物质）等营养物质；培养基一般用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行．
对微生物进行分离和计数可采用稀释涂布平板法完成
（4）一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓度过高，为避免此种现象，应对菌液进行梯度稀释（加大稀释倍数）．
对菌液进行梯度稀释用固定化酶技术，可以使脲酶反复使用，提高了酶的利用率．
故答案为：
（1）不能    培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源
（2）稀释涂布平板 菌落数目
（3）碳源、氮源、维生素（特殊营养物质）      高压蒸汽灭菌法进行灭菌    无菌
（4）菌液浓度过高       对菌液进行梯度稀释（加大稀释倍数）

点评 本题以培养基成分的表格为载体，考查微生物的筛选与培养的知识，考生识记培养基的成分、无菌技术中的灭菌方法和微生物培养的条件，掌握培养基的种类及功能和实验设计的原则是解题的关键．