Question

【题目】回答与微生物的培养、分离及应用有关的问题：

(1)微生物相关实验常常要求进行无菌操作，如在使用三角瓶时需依次用 ______________、牛皮纸封口后进行灭菌，制备尿素固体培养基过程中采用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌法和 _____________________。

(2)采用如图固定化装置进行葡萄糖发酵制酒精，图中 a 是 ____________，该实验中其可以反复利用，实验过程一定要在____________、无氧且温度和 pH 适宜等条件下进行。在发酵过程中 葡萄糖浓度不能过高，否则 __。在使用较低浓度葡萄糖溶液过柱时，反应柱流 出液中仍有葡萄糖， 其原因可能 是_________(答出 2 点)。

(3)在果酒酿造过程中，如果果汁灭菌不严格，含有醋杆菌，酒精发酵旺盛时，醋杆菌不能将果汁中的糖发酵为酸的原因是 _______。为了测定酵母菌的活细胞密度，将待测菌液稀释 1000 倍后， 经等体积的染色剂溶液染色( 活细胞无色，死细胞蓝色)，用血细胞计数板计数( 规格 2mmx2mx0.1mm，有 25 个中方格)，理论上计算 5个中方格的活细胞数不应少于 __________________才能达到每毫升 3×109 个活细胞的预期密度。

(4)用比色计测定某种果醋中的葡萄糖含量，需要制作____的标准曲线。实验中一般不能更换比色杯，若制作标准曲线时的比色杯光程小于测定样液的比色杯光程，测得的样液中葡萄糖含量 ______ (填“偏大”、“偏小”或“无影响”)。

Answer 1

【答案】封口膜(或 6 层纱布) G6 玻璃砂漏斗过滤 固定化酵母 无菌 酵母菌会因失水过多而死亡 反应柱中流速过快、固定化酵母细 胞数目较少 醋杆菌是好氧细菌，而果酒发酵为无氧环境，醋杆菌无法生存 120 葡萄糖浓度与光密度值关系 偏大

【解析】

分析题图：图示为固定化酵母的反应柱示意图，图中a为固定化酵母，当原料葡萄糖从漏斗口进活塞1进入反应柱，在固定化酵母的发酵，产物酒精经活塞2流出。图中长的弯形导管有排气（酵母产生的CO2）和防止外来杂菌污染的作用。

(1)在使用三角瓶时需依次用封口膜或 6 层纱布和牛皮纸封口后进行干热灭菌；制备的尿素固体培养基可以采用高压蒸汽灭菌法和G6 玻璃砂漏斗过滤。

(2)结合前面的分析可知，图中a是固定化酵母，在该实验中可以反复利用；根据酵母菌的无氧发酵要求可知，实验过程一定要在无菌、无氧且温度和pH适宜等条件下进行。为了防止酵母菌会因失水过多而死亡，在发酵过程中所用的葡萄糖浓度不能过高。如果所采用的葡萄糖浓度较低的情况下反应柱流出液中仍含有葡萄糖，其可能原因是反应柱中流速过快或者反应柱中固定化酵母细胞数目较少。

(3)果酒（酵母菌无氧呼吸才能产生酒精）是在无氧条件完成，而果醋发酵（醋酸菌是需氧菌）需要在氧气充足的条件下进行，所以当酒精发酵旺盛时，醋杆菌不能将果汁中的糖发酵为酸。1毫升悬液中待测标本（菌体）总数＝80小方格内菌体数÷80×400÷(2×2×0.1)×103×稀释倍数。而台盼蓝与菌液等体积加入，因此要达到每毫升3×109个活细胞的预期密度，理论上无色细胞数应该不少于(3×109) ÷(1.25×105×2×103)=120个。（注意：5个中方格含80个小格，而血球计数板共400个小格）。

(4)借用比色法测定亚硝酸盐含量的方法可知，用比色计测定果醋中葡萄糖含量，需要先制作葡萄糖浓度与光密度值关系的标准曲线。实验中一般不能更换比色杯，若制作标准曲线时的比色杯光程小于测定样液的比色杯光程，测得的样液中葡萄糖含量偏大。